【摘 要】
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目的:1、探讨触液神经元在体内、外是否具有神经干细胞特性。2、探讨VEGFR-3是否可以激活触液神经元的干细胞潜能。方法:体外研究:分离培养触液神经元,利用免疫荧光技术检测触液神经元特异性标记物PKD2L1与神经干细胞标记物Nestin、SOX2以及与VEGFR-3荧光双标情况;体外悬浮培养的触液神经元分为4组:A组为对照组:仅用无血清神经培养基培养;B组为VEGF-C组:在无血清神经培养基中加入
【基金项目】
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国家自然科学基金（81960234）,题目:触液神经元的神经干细胞潜能及其在脊髓损伤修复中作用研究；
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目的:1、探讨触液神经元在体内、外是否具有神经干细胞特性。2、探讨VEGFR-3是否可以激活触液神经元的干细胞潜能。方法:体外研究:分离培养触液神经元,利用免疫荧光技术检测触液神经元特异性标记物PKD2L1与神经干细胞标记物Nestin、SOX2以及与VEGFR-3荧光双标情况;体外悬浮培养的触液神经元分为4组:A组为对照组:仅用无血清神经培养基培养;B组为VEGF-C组:在无血清神经培养基中加入VEGF-C（终浓度为50ng/ml）;C组为DMSO对照组:无血清神经培养液+0.05%DMSO;D组为SAR131675组:在无血清神经培养基中加入VEGFR-3抑制剂SAR131675（用0.05%DMSO配置,终浓度为100nmol/L）。在加药后第5天检测触液神经元成球大小及数量,以及与增殖标记物Ki67共表达情况来分析其增殖情况。体内研究:取6-8周C57BL/6小鼠颈髓组织,利用冰冻切片（30μm）免疫荧光验证PKD2L1阳性表达的触液神经元体内位置及形态,并与VEGFR-3以及神经干细胞标记物Nestin、SOX2共表达情况;随机将小鼠分为4组:A组为无菌水对照组:侧脑室注射无菌水4μL;B组为VEGF-C组:侧脑室注射VEGF-C（250ng/μL）4μL;C组为DMSO对照组:首日腹腔注射5%DMSO400μL,接下来连续6天注射200μL;D组为SAR131675组:首日腹腔注射SAR131675（50ng/μL）400μL,接下来连续6天注射200μL;A、B组分别于第3、7、14、21天取材,利用冰冻切片免疫荧光技术检测触液神经元标记物PKD2L1与激活标记物EGFR、增殖标记物Ki67、迁移标记物DCX共表达情况;C、D组分别于第7天取材,利用冰冻切片免疫荧光技术检测触液神经元标记物PKD2L1与激活标记物EGFR、增殖标记物Ki67、PCNA共表达情况。结果:体外研究:1、触液神经元标记物PKD2L1与VEGFR-3以及神经干细胞标记物Nestin、SOX2共表达;2、在触液神经元中加入VEGF-C,发现形成的神经球数量较多且直径更大,Ki67免疫荧光染色较对照组明显增强;在触液神经元中加入SAR131675,发现形成的神经球的数量较少且直径较小,Ki67免疫荧光染色较对照组明显减弱。体内研究:1、发现触液神经元围绕在中央管周围,其突触位于中央管内与脑脊液相接触。触液神经元特异性标记物PKD2L1与VEGFR-3以及神经干细胞标记物Nestin、SOX2共表达;2、VEGF-C组触液神经元的特异性标记物PKD2L1与激活状态标记物EGFR、细胞增殖标记物Ki67、迁移标记物DCX共同标记细胞数量较对照组增多,第7天达到高峰期,并且在第7天可发现向背侧迁移触液神经元;3、SAR131675组触液神经元的特异性标记物PKD2L1与激活状态标记物EGFR、细胞增殖标记物Ki67、PCNA共同标记细胞较对照组减少。结论:1、触液神经元特异性标记物PKD2L1与神经干细胞标记物Nestin及SOX2在体内、外均共表达,证明了触液神经元在体内、外均具有神经干细胞特性。2、触液神经元在体内、外均表达VEGFR-3。3、VEGFR-3可以激活触液神经元干细胞潜能,促进其发生增殖、迁移;条件性缺失VEGFR-3后,触液神经元增殖能力降低。
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