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【目的】
黄皮果是一种含糖量较高的药食同源的水果，但其保鲜周期短，易腐坏。因此利用黄皮果废果资源开发果胶产品有利于提高黄皮果的经济附加值。本文以黄皮果为研究对象，以纯果胶得率为指标，对黄皮果果胶的提取工艺进行优化并分析其理化性质，制备符合国家标准的果胶。其次，对黄皮果果胶的结构和流变特性进行分析，建立相应的质量标准并为其在食品和药品行业的应用提供理论依据。进一步探究黄皮果果胶对人黑色素瘤A375细胞黑色素合成的影响并初步研究其作用机制。
【方法】
1.运用酸提取法提取黄皮果果胶。以纯果胶得率为评价指标，分别考察提取溶剂、初始pH值、液料比、提取温度及时间等因素对纯果胶得率的影响。在此基础上，采用响应面试验优化黄皮果果胶的制备工艺，确定最佳提取工艺条件。
2.采用国家标准食品一般成分检测方法及行业标准分析并检测黄皮果及果胶的基本理化性质，并利用高效液相色谱法、傅立叶红外光谱法和核磁共振等检测手段分别探讨其单糖组成及结构。
3.以表观黏度为考察指标，考察黄皮果果胶在浓度、温度、pH、蔗糖及钙离子等因素影响下的流变学特性，并与商业化的苹果果胶进行比较。
4.通过多巴氧化法检测不同浓度的黄皮果果胶对酪氨酸酶活性的影响。
5.构建α-黑素细胞刺激素（α-melanocyte-stimulatinghormone，α-MSH）诱导的人黑色素瘤A375细胞内黑色素高表达的模型。用不同浓度的黄皮果果胶处理细胞，用MTT法检测细胞活性；用多巴氧化法检测其对A375细胞内酪氨酸酶活性的影响；用NaOH法检测细胞内的黑色素含量；用蛋白免疫印迹法检测A375细胞中的酪氨酸酶（Tyrosinase，TYR）、酪氨酸酶相关蛋白-1（Tyrosinase-relatedprotein-1，TYRP-1）、酪氨酸酶相关蛋白-2（Tyrosinase-related protein-2，TYRP-2）和小眼畸形相关转录因子（Microphthalmia-associatedtranscriptionfactor，MITF）蛋白的表达水平。
【结果】
1.根据响应面试验法优化的结果，最终黄皮果果胶的优化提取工艺条件为：提取时间为150min、提取温度90℃、pH为2.0、液料比为20ml/g，得到黄皮果纯果胶得率为（6.54±0.27）%。
2.通过检测黄皮果果胶的基本理化指标可知，提取的黄皮果果胶的总半乳糖醛酸为77.33%，酯化度为60.55%，属于高酯果胶。进一步通过HPLC、红外、核磁等检测手段鉴定了2种黄皮果果胶，其中A组分占97.47%，分子量为2.524×105Da，B组分占1.21%，分子量为7.266×104Da。
3.通过对黄皮果果胶的流变学特性的研究可知，黄皮果果胶浓度从0.2%增加到2.0%时，黄皮果果胶溶液的表观黏度随之增加；当温度由30℃升高至100℃时，黄皮果果胶溶液的表观黏度随之降低；当pH在2～4范围内，黄皮果果胶溶液的表观黏度随之增加；而pH大于6时，黄皮果果胶溶液的表观黏度随之降低；当蔗糖浓度增加至16%时，黄皮果果胶溶液的表观黏度从2.75mPa/s增加至3.37mPa/s；钙离子浓度低于0.3%，黄皮果果胶溶液的表观黏度随之增加，而钙离子浓度大于0.4%后，黄皮果果胶溶液的表观黏度呈现下降的趋势。
4.通过检测酪氨酸酶的活性可知，不同浓度的黄皮果果胶对酪氨酸酶活性均有一定的抑制作用。
5.黄皮果果胶对α-MSH诱导的A375细胞内的酪氨酸酶活力及黑色素合成具有显著的抑制作用（P<0.05或P<0.01）；与模型组相比，黄皮果果胶能抑制A375细胞内TYR、TYRP-1、TYRP-2和MITF蛋白的表达。
【结论】
1.盐酸是以酸提取法获取黄皮果果胶的最佳溶剂，而提取温度是影响果胶得率的显著因素。
2.黄皮果果胶A、B组分的平均分子量分别为2.524×105Da、7.266×104Da，主要由甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸和半乳糖等单糖组成，而半乳糖和半乳糖醛酸占比大于80%。
3.果胶浓度和蔗糖浓度的升高可以提高黄皮果果胶溶液的表观黏度；温度的升高会降低黄皮果果胶溶液的表观黏度；当溶液过酸或过碱时，均使果胶溶液的表观黏度出现不同程度的下降；钙离子浓度大于0.4%使黄皮果果胶溶液的表观黏度下降。
4.黄皮果果胶能显著抑制α-MSH诱导的A375细胞黑色素的合成。其机制可能与其抑制TYR、下调TYRP-1、TYRP-2及MITF蛋白的表达水平，从而抑制依赖于α-MSH诱导的酪氨酸酶信号通路有关。
黄皮果是一种含糖量较高的药食同源的水果，但其保鲜周期短，易腐坏。因此利用黄皮果废果资源开发果胶产品有利于提高黄皮果的经济附加值。本文以黄皮果为研究对象，以纯果胶得率为指标，对黄皮果果胶的提取工艺进行优化并分析其理化性质，制备符合国家标准的果胶。其次，对黄皮果果胶的结构和流变特性进行分析，建立相应的质量标准并为其在食品和药品行业的应用提供理论依据。进一步探究黄皮果果胶对人黑色素瘤A375细胞黑色素合成的影响并初步研究其作用机制。
【方法】
1.运用酸提取法提取黄皮果果胶。以纯果胶得率为评价指标，分别考察提取溶剂、初始pH值、液料比、提取温度及时间等因素对纯果胶得率的影响。在此基础上，采用响应面试验优化黄皮果果胶的制备工艺，确定最佳提取工艺条件。
2.采用国家标准食品一般成分检测方法及行业标准分析并检测黄皮果及果胶的基本理化性质，并利用高效液相色谱法、傅立叶红外光谱法和核磁共振等检测手段分别探讨其单糖组成及结构。
3.以表观黏度为考察指标，考察黄皮果果胶在浓度、温度、pH、蔗糖及钙离子等因素影响下的流变学特性，并与商业化的苹果果胶进行比较。
4.通过多巴氧化法检测不同浓度的黄皮果果胶对酪氨酸酶活性的影响。
5.构建α-黑素细胞刺激素（α-melanocyte-stimulatinghormone，α-MSH）诱导的人黑色素瘤A375细胞内黑色素高表达的模型。用不同浓度的黄皮果果胶处理细胞，用MTT法检测细胞活性；用多巴氧化法检测其对A375细胞内酪氨酸酶活性的影响；用NaOH法检测细胞内的黑色素含量；用蛋白免疫印迹法检测A375细胞中的酪氨酸酶（Tyrosinase，TYR）、酪氨酸酶相关蛋白-1（Tyrosinase-relatedprotein-1，TYRP-1）、酪氨酸酶相关蛋白-2（Tyrosinase-related protein-2，TYRP-2）和小眼畸形相关转录因子（Microphthalmia-associatedtranscriptionfactor，MITF）蛋白的表达水平。
【结果】
1.根据响应面试验法优化的结果，最终黄皮果果胶的优化提取工艺条件为：提取时间为150min、提取温度90℃、pH为2.0、液料比为20ml/g，得到黄皮果纯果胶得率为（6.54±0.27）%。
2.通过检测黄皮果果胶的基本理化指标可知，提取的黄皮果果胶的总半乳糖醛酸为77.33%，酯化度为60.55%，属于高酯果胶。进一步通过HPLC、红外、核磁等检测手段鉴定了2种黄皮果果胶，其中A组分占97.47%，分子量为2.524×105Da，B组分占1.21%，分子量为7.266×104Da。
3.通过对黄皮果果胶的流变学特性的研究可知，黄皮果果胶浓度从0.2%增加到2.0%时，黄皮果果胶溶液的表观黏度随之增加；当温度由30℃升高至100℃时，黄皮果果胶溶液的表观黏度随之降低；当pH在2～4范围内，黄皮果果胶溶液的表观黏度随之增加；而pH大于6时，黄皮果果胶溶液的表观黏度随之降低；当蔗糖浓度增加至16%时，黄皮果果胶溶液的表观黏度从2.75mPa/s增加至3.37mPa/s；钙离子浓度低于0.3%，黄皮果果胶溶液的表观黏度随之增加，而钙离子浓度大于0.4%后，黄皮果果胶溶液的表观黏度呈现下降的趋势。
4.通过检测酪氨酸酶的活性可知，不同浓度的黄皮果果胶对酪氨酸酶活性均有一定的抑制作用。
5.黄皮果果胶对α-MSH诱导的A375细胞内的酪氨酸酶活力及黑色素合成具有显著的抑制作用（P<0.05或P<0.01）；与模型组相比，黄皮果果胶能抑制A375细胞内TYR、TYRP-1、TYRP-2和MITF蛋白的表达。
【结论】
1.盐酸是以酸提取法获取黄皮果果胶的最佳溶剂，而提取温度是影响果胶得率的显著因素。
2.黄皮果果胶A、B组分的平均分子量分别为2.524×105Da、7.266×104Da，主要由甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸和半乳糖等单糖组成，而半乳糖和半乳糖醛酸占比大于80%。
3.果胶浓度和蔗糖浓度的升高可以提高黄皮果果胶溶液的表观黏度；温度的升高会降低黄皮果果胶溶液的表观黏度；当溶液过酸或过碱时，均使果胶溶液的表观黏度出现不同程度的下降；钙离子浓度大于0.4%使黄皮果果胶溶液的表观黏度下降。
4.黄皮果果胶能显著抑制α-MSH诱导的A375细胞黑色素的合成。其机制可能与其抑制TYR、下调TYRP-1、TYRP-2及MITF蛋白的表达水平，从而抑制依赖于α-MSH诱导的酪氨酸酶信号通路有关。