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背景和目的:天疱疮是一种严重的自身免疫性大疱性皮肤病,典型皮损表现为在正常皮肤或粘膜上发生松弛性水疱,易破溃,破溃后形成糜烂,组织病理学表现为表皮内棘层松解。寻常型天疱疮（pemphigus vulgaris,PV）和落叶型天疱疮（pemphigus foliaceus,PF）是两种常见的天疱疮亚型。目前公认的天疱疮的发病机制是:由于患者体内存在主要针对角质形成细胞间连接结构桥粒芯糖蛋白（desmoglein,Dsg）1和/或Dsg3的致病性自身抗体,引起抗原抗体反应,通过改变桥粒结构及激活细胞内信号转导通路,最终导致细胞间黏附丧失,即棘层松解。越来越多的证据表明,血清中抗Dsg1及抗Dsg3的Ig G抗体是天疱疮的生物标志物,具有诊断价值,能反映疾病活动度和病情严重程度,并能提示治疗反应。较多研究证实了天疱疮患者的抗Dsg1抗体水平与皮肤严重程度之间的正相关关系,高水平抗Dsg1抗体的持续存在对皮肤复发有预测价值,但抗dsg3抗体水平与疾病活动之间的关系存在争议,抗Dsg3抗体持续存在并不一定意味着粘膜复发。临床上也存在一些患者临床症状缓解,但血清抗Dsg1抗体或抗Dsg3抗体水平仍持续高滴度。因此,探索新的能反映天疱疮疾病活动度和提示治疗反应的生物标志物意义重大。microRNA（miRNA）是一类内源性基因编码的非编码小RNA,作为一种基因调控因子,通过与靶基因的3’UTR区结合,降解靶基因m RNA或抑制靶基因翻译,在细胞增殖、迁移、分化、凋亡等多种生物学功能中发挥重要作用。一种miRNA可以同时调控多个靶基因,一个基因也可以被多个miRNA调控。miRNA既能在组织中表达,又可进入体液循环,并在血液及其他体液中稳定存在,成为循环miRNA。循环miRNA被证实能够作为系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、大疱性类天疱疮等多种自身免疫疾病的生物学标志物。但至今为止,对天疱疮相关miRNA的报道非常有限,仅有研究报道了天疱疮患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）中miR-424-5p和miR-338-3p的表达升高。然而,在天疱疮血清中miRNA的表达是否发生了改变,目前尚不清楚。本研究的目的是检测天疱疮患者血清中miRNA的表达水平,找出可反映疾病活动度和治疗反应的差异表达的miRNA,并为天疱疮临床治疗提供新的生物标志物,对差异表达的miRNA进行靶基因预测及验证,为进一步研究天疱疮的发病机制提供方向。材料与方法:1.研究对象:本研究血清样本来源于中国医科大学附属第一医院患者,纳入了2016年12月至2019年12月于皮肤科住院的27例活动期PV患者及26例活动期PF患者,均为初次患病且未接受激素及免疫抑制剂治疗。纳入27例性别、年龄匹配的健康对照。2.采用Taqman MicroRNA Array检测8例PV患者、8例PF患者及8例健康对照血清中microRNA表达,对芯片结果进行分析,筛选出差异性miRNA。3.选取19例PV患者、18例PF患者及19例健康对照的血清,对表达稳定的差异性miRNA应用q PCR验证。4.采用ELISA法检测19例PV患者、18例PF患者及19例健康对照血清中抗Dsg1抗体、抗Dsg3抗体的水平,并与差异性miRNA进行相关性分析。5.应用生物信息学数据库,对差异表达miRNA进行靶基因预测。6.双萤光素酶报告基因验证miRNA与靶基因的结合情况。7.q PCR检测转染miRNA模拟物（mimic）及模拟物阴性对照（mimic NC）的Ha Ca T细胞的靶基因m RNA的达变化。8.Western Blot检测转染miRNA mimic及mimic NC的Ha Ca T细胞的靶基因的蛋白水平变化。9.统计学分析:应用Graph Pad Prim及SPSS软件进行统计分析。结果以中位数和四分位间距（IQR）表示。非正态分布的连续变量应用Mann-Whitney U检验。配对数据应用Wilcoxon signed-rank检验。P＜0.05时具有统计学差异。结果:第一部分:1.PV组共筛选出47个差异性miRNA,其中20个上调,27个下调。2.q PCR验证发现,PV患者血清中let-7e-5p、miR-26b-5p、miR-374a-5p的相对表达量显著下调。3.血清中let-7e-5p、miR-26b-5p、miR-374a-5p的相对表达量与抗Dsg1、抗Dsg3抗体水平的相关性无统计学意义。4.用ROC曲线评估血清let-7e-5p、miR-26b-5p、miR-374a-5p对PV的诊断效率,AUC值分别为0.765、0.726、0.723,认为let-7e-5p、miR-26b-5p、miR-374a-5p对PV均有一定的诊断价值。5.与疾病活动期相比,PV患者血清let-7e-5p的相对表达量在疾病控制期显著升高。第二部分:1.PF组共筛选出43个差异性miRNA,其中25个上调,18个下调。2.q PCR验证发现,PF患者血清中miR-26b-5p、miR-320b的相对表达量均显著下调。3.用ROC曲线评估血清miR-26b-5p、miR-320b对PF的诊断效率,AUC值分别为0.702和0.737,血清miR-26b-5p、miR-320b对于PF均有一定的诊断价值。4.血清中miR-26b-5p、miR-320b的相对表达量与抗Dsg1抗体水平的相关性无统计学意义。5.PF患者血清miR-26b-5p、miR-320b在疾病活动期与疾病控制期的相对表达量差异无统计学意义。第三部分:1.hsa-let-7e-5p显著下调h-DSG3-3UTR-WT的萤光素酶的表达。2.let-7e-5p mimic及mimic NC转染Ha Ca T细胞的DSG3 m RNA相对表达水平无显著差异。3.let-7e-5p mimic转染的Ha Ca T细胞DSG3蛋白表达减少。结论:1.在PV患者血清中let-7e-5p,miR-26b-5p,miR-374a-5p显著下调。2.PV患者血清let-7e-5p在有效治疗后显著上调。3.血清let-7e-5p可作为反映PV疾病活动度和治疗反应的生物标志物。4.在PF患者血清中miR-26b-5p,miR-320b显著下调。5.let-7e-5p与DSG3 3’UTR靶向结合,干扰DSG3的翻译,调节DSG3的蛋白表达。