背景与目的:我国是肝炎大国,因肝炎后肝硬化并发症死亡的人数逐年增加,其中门脉高压症导致的上消化道出血是最重要的死因。目前针对肝炎后肝硬化合并门脉高压症患者的外科治疗手段中,最常用的方法是脾切除联合贲门周围血管离断术。但术后门静脉系统血栓形成发生率较高,严重影响患者预后,若处置不当甚至可危及患者生命。目前国内外针对门静脉系统血栓形成临床上主要通过抗凝治疗等方式,但不能明显降低血栓形成发生率,且相关发生机制尚有待阐明,无法满足临床需求。近来,国内外多项研究表明肠道微生态通过介导某些特定通路参与了血栓形成事件,我们拟以此为切入点,并通过Illumina Hiseq宏基因组分析,比较术后门脉有无血栓形成患者肠道微生态的表达谱及功能特征性变化,探究其中起关键作用的微生物成分及潜在通路,从而为临床防治提供新的思路和靶点。同时也为后期的临床有效诊治提供理论依据。方法:我们共收集了15例患者的临床样本,其中7例脾切断流术后门静脉系统血栓形成患者(血栓组)和8例脾切断流术后无门静脉系统血栓形成患者的粪便样本(非血栓组)作为研究对象,分别对两组样本进行宏基因组测序分析,通过多层次的主坐标分析(Principal Co-ordinates Analysis,PCoA)、Venn图、组间差异分析、线性判别分析及影响因子(Linear discriminant analysis Effect Size,LEf Se)分析,进而通过代谢通路分析和物种贡献度分析等方法探究腹腔镜脾切断流术后门静脉血栓形成患者肠道微生态从物种结构到功能所发生的表达谱和特征性变化。结果:1.PCoA结果显示:两组样本具有明显的分离趋势,表明两组样本中肠道微生态在整体的组成和结构上存在明显差异。进一步通过ADONIS分析,结果表明两组中肠道微生态组成和结构差异具有统计学意义,由此可见本次检验结果高度可信(P<0.05)。2.Venn图分析结果显示两组共有相同微生物1273种,血栓组中独有199种,非血栓组中独有的物种有343种。两组分析涉及相同代谢通路有6947种,血栓组共有8148种,特有的代谢通路有1201种,非血栓组共有7355种,特有代谢通路有408种。血栓组和非血栓组在物种含量,代谢通路数量上均存在差异(P<0.05)。3.两组中丰度含量较高的菌门(相对丰度>1%)主要集中在厚壁菌门、变形菌门、拟杆菌门和放线菌门,其中厚壁菌门丰度最高。种属水平上,拟杆菌属、乳杆菌属、梭菌种、普雷沃菌属、副拟杆菌属、瘤胃球菌种、链球菌种、另枝菌种、埃希菌属、真杆菌属和肠球菌属等在两组样本中均有较高的丰度(相对丰度>1%)。4.对两组样本菌群进行组间差异分析显示,在门水平上两组无统计学差异。属水平上,两组有统计学差异的菌属有22种,其中梭菌属、埃希菌属在血栓组中含量高于非血栓组,其余20种菌属含量均低于非血栓组(P<0.05)。5.通过线性判别分析及影响因子(Linear discriminant analysis Effect Size,LEf Se)分析,结果显示血栓组患者肠道中关键菌群主要集中在子囊菌门。非血栓组患者肠道中关键菌群主要集中在变形菌门。6.两组中的代谢通路主要集中在碳水化合物代谢,全局和概述地图,氨基酸代谢、膜转运以及核苷酸代谢等。7.对两组的功能代谢比较分析结果显示有统计学差异的代谢通路有31种,其中9种功能代谢在血栓组中高于非血栓组,分别是醚脂质代谢、肾细胞癌代谢、甘油脂代谢、双组分系统、抗坏血酸和醛酸代谢、赖氨酸降解、磷酸戊糖途径、恰加斯病(美国锥虫病)、朊病毒疾病。其余22种功能代谢在血栓组中低于非血栓组(P<0.05)。8.通过主要差异物种功能贡献度分析显示拟杆菌属、乳酸杆菌属、副拟杆菌属、链球菌属、真细菌属、梭菌属均有重要贡献。其中,拟杆菌属贡献最大。结论:1.血栓组患者肠道微生态多样性发生了特征性变化,主要表现为梭菌属、埃希菌属升高和拟杆菌属降低。2.血栓组患者肠道中功能代谢发生了明显改变,主要表现为糖分解增多、脂类代谢加强、氨基酸代谢改变。3.血栓组患者肠道微生态从物种结构到功能代谢均发生了显著变化,本实验初步探讨了术后门静脉血栓形成患者肠道微生态所发生的表达谱变化,为下一步探究术后门静脉血栓形成的发病信号通路和分子机制、临床防治提供了新的思路和靶点。同时也为后期的研究提供理论依据。