目的:本研究的目的是探讨肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）和机械拉伸联合作用于MC3T3-E1细胞,对其成骨分化的影响以及该过程中核转录因子kappa B（nuclear factor-kappa B,NF-κB）信号通路的作用。方法:在MC3T3-E1细胞培养基内加入两种浓度的TNF-α（0.5和10 ng/m L）,使用Flexell 4000细胞加载系统以12%的幅度拉伸12 h,探讨炎性因子存在条件下机械拉伸对成骨细胞分化的影响;MC3T3-E1细胞用NF-κB信号通路抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸酯（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）预处理后,在10 ng/m L的TNF-α存在条件下以12%的幅度拉伸细胞12 h,探讨在成骨分化过程中NF-κB通路调控的因子。采用Western blot和RT-PCR技术在蛋白和基因水平上检测骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、I型胶原蛋白（type I collagen,COL1）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）、Runt相关转录因子2（runt-related transcription factor2,Runx2）、骨钙素（osteocalcin,OCN）、核转录因子κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand,RANKL）、NF-κB和磷酸化NF-κB（phosphorylated NF-κB,p-NF-κB）的表达。结果:单独进行机械拉伸可显著增加OPG、COL1、Runx2、ALP和OCN的表达,但RANKL的表达及RANKL/OPG比值均降低。TNF-α单独作用导致COL1、Runx2、ALP、OPG和OCN表达的显著下调,并促进RANKL的表达,增加RANKL/OPG比值。在TNF-α存在下,机械拉伸引起的上调或下调均受到明显抑制。P-NF-κB/NF-κB比值在TNF-α和机械拉伸的作用下均升高。抑制NF-κB信号通路可抑制TNF-α和机械拉伸诱导的COL1、OCN、ALP和OPG的表达变化。结论:结果提示,MC3T3-E1细胞的成骨分化在机械拉伸作用下被促进,而TNF-α会抑制其成骨分化,且TNF-α对机械拉伸诱导的MC3T3-E1细胞成骨分化有明显抑制作用,NF-κB信号通路参与了该过程,可调控OPG、COL1、ALP和OCN的表达。