赶黄草总黄酮的制备及其治疗肾病综合征大鼠的研究

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目的:本论文对赶黄草(Penthorum chinense Pursh.)的地上部分(茎、叶及花)总黄酮进行提取、纯化工艺研究,对赶黄草茎中6种黄酮类化合物的含量进行测定,并研究赶黄草总黄酮对阿霉素肾病综合征模型大鼠尿蛋白的影响。为研究赶黄草总黄酮对其它肾病的作用奠定基础,也为把赶黄草总黄酮研发治疗肾病综合征等肾病的新药奠定基础。方法:采用紫外分光光度法,以乔松素为对照,以总黄酮含量为检测指标,以单因素试验结合正交设计优化提取工艺。以聚酰胺目数、静态吸附时间、pH、上样液浓度、上样量、水用量、洗脱溶剂pH、流速、乙醇浓度及乙醇用量为考察因素,比较聚酰胺对赶黄草总黄酮的吸附率、解吸率,确定最佳纯化工艺。在最佳提取工艺条件下采用HPLC法同时测赶黄草茎中六种黄酮类成分的含量。取雄性SD大鼠60只,从中随机抽取8只设为A组(空白对照组),其余52只尾静脉注射阿霉素(5 mg/kg,分两次给药)制造肾病综合征模型,21天模型制备成功后将剩下的大鼠随机均分为四组,分别是B组(模型组)、C组(阳性对照组)、D组(赶黄草总黄酮高剂量组)、E组(赶黄草总黄酮低剂量组)。赶黄草总黄酮的成人剂量为0.016-0.032 g/(kg·d),按成人与大鼠用药量换算方法,则高、低剂量组分别给予赶黄草总黄酮0.2 g/(kg·d)、0.1g/(kg·d),阳性对照组醋酸泼尼松片,用蒸馏水配成混悬液灌胃,剂量为6mg/(kg·d),空白对照组和模型组灌胃等体积的蒸馏水,连续给药4周,每2周收集一次尿液,并记录尿液体积,观察大鼠24 h尿蛋白定量的变化。药物干预4周后处死大鼠,取血清,检测各组大鼠血清生化指标。一部分肾组织进行HE和Masson染色,光镜下观察肾组织变化。结果:赶黄草总黄酮最佳提取工艺:料液比1:6(g/mL)的55%的乙醇回流提取3次,每次1.5 h;最佳纯化工艺:选择60-90目聚酰胺,样品浓度为5.0 mg/mL,上样量3.5 BV,水液pH值为3,水用量为25 BV,用pH值为8的10 BV体积的75%乙醇洗脱,经纯化后的赶黄草总黄酮得率为77.88%。且赶黄草总黄酮在干浸膏中含量由15.35%提高到44.88%。肾病综合征大鼠造模成功后,给予不同剂量的赶黄草总黄酮干预4周后,同模型组相比,赶黄草总黄酮高低剂量组TC、TG、大鼠24 h尿蛋白量水平显著降低,赶黄草高剂量组TP水平显著升高,肾脏纤维化和损伤均有明显改善。结论:该提取与纯化工艺合理、可行、稳定,可有效提取和纯化赶黄草总黄酮。赶黄草茎中6种黄酮类化合物中槲皮素和芹菜素的含量相对较高。赶黄草总黄酮能明显降低肾病综合征大鼠尿蛋白。
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