目的:目前研究认为NNT(烟酰胺核苷酸转移酶)和TRX()均参与线粒体能量代谢,阻止ROS过量产生,降低氧化应激对神经细胞的毒性作用。在我们以前的蛋白质组学研究中,发现在TG小鼠的脑和脊髓中NNT和TRX表达是上调的。本实验主要是在肌萎缩侧索硬化(ALS)G93A-SOD1转基因小鼠模型中,初步探明ALS小鼠中NNT、TRX与神经细胞死亡之间的关系,以寻找ALS潜在的发病机制及治疗方法。方法:购买G93A-SOD1转基因小鼠,饲养、繁殖,子代小鼠用PCR技术进行检测并筛选出携带G93A-SOD1突变基因小鼠动物模型,甲醛固定实验小鼠,完整取出小鼠的脑、脊髓,然后再次用甲醛固定、用不同浓度的蔗糖溶液梯度脱水、OTC胶包埋、-80℃冰箱保存、做成组织切片;不同脊髓节段组织切片均行免疫荧光双标染色,分别标记NNT、TRX、GFAP、Oligo、NeuN及细胞核,在荧光显微镜的同一视野、同一放大倍数下进行观察并拍照记录,拍摄后的图片用NIS-Element F、IPP等图像处理软件进行相应的处理。我们观察分析了NNT和TRX阳性细胞在不同疾病阶段(未发病组60-70d、发病组90-100d、进展组120-130d)、不同脊髓节段(颈、胸、腰段脊髓)中的变化特点,与神经元细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞之间免疫相关性及NNT和TRX阳性细胞数量变化与神经细胞死亡之间的关系。结果:1、在SOD1 WT小鼠中,NNT阳性细胞(NNTPCs)分布于整个脊髓解剖区域中,且颈段、胸段和腰段脊髓之间没有明显差异。2、在SOD1 WT小鼠中,NNT分布于少突胶质细胞和神经元的细胞核和细胞质中,并随着年龄增长而增加。3、在TG小鼠中,NNTPCs随着疾病的进展显著增加,颈段、胸段和腰段脊髓之间没有明显差异,说明NNT在不同脊髓节段之间没有迁移;但可见从GM转移到WG,从中央管周围灰质(GCC)、后角(PH)转移到AH,以及从AF和PF转移到LF;NNT主要分布于少突胶质细胞和神经元中,在TG小鼠中,NNT不仅有表达量的增加,而且可以观察到从细胞核迁移到细胞质中。4、TRX分布于NNT的同一神经细胞中,随着疾病的进展TRXPCs也逐渐增多,在TG小鼠中TRX不仅有表达量的减少,而且可以观察到从细胞质迁移到细胞核中。结论:本研究提示NNT可能通过TRX途径参与了ALS的发病机制,主要作用机制可能增加线粒体能量代谢,阻止ROS过量产生,降低氧化应激对神经细胞的毒性,从而对ALS起到一定的保护作用。