湖北钉螺OhMIF基因的相关研究及其与人源CD74和JAB1的相互作用

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在我国,日本血吸虫病是传播最广泛的人体寄生虫病,日本血吸虫病全世界范围内的感染人数超过2.5亿人,是严重危害人类健康和社会经济的一种人畜共患寄生虫病。湖北钉螺(Oncomelaniahupensis)是日本血吸虫的唯一中间宿主。本论文中所做研究中的钉螺来自于江西省星子县疾控中心的湖北钉螺种属。巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)是一种重要的炎症细胞因子,是炎症的关键上游介质。MIF是个功能多样的细胞因子,在宿主对抗外来病原和微生物入侵以及产生的炎症反应中有重要的免疫调节功能。我们首先对钉螺总RNA进行提取,反转录为cDNA,再用特异性引物扩增出我们需要的OhMIF基因,通过一系列基因重组实验,对表达的蛋白进行提取和纯化,得到的纯化蛋白在小鼠皮下注射进行免疫,产生抗体。同时为了MIF基因在不同物种间的相似性,我们预测了OhMIF蛋白和TsMIF蛋白的空间结构,并对OhMIF与人源CD74蛋白和JAB1蛋白相互作用来进行功能上相似性的验证。有研究显示,Ⅱ型跨膜蛋白CD74是一种蛋白质运输调节剂,在与MIF的结合下启动信号传导。本文中我们将人源的CD74基因进行了克隆和表达载体构建,通过表达出来的人源CD74蛋白与湖北钉螺OhMIF进行相互作用,验证它们之间是否也能存在结合关系,再用MIF抑制剂ISO-1对它们的结合进行了抑制研究,发现随着ISO-1浓度的增加,抑制效果更明显。同样我们对湖北钉螺OhMIF蛋白与人源的JAB1蛋白的相互作用进行了研究。c-Jun激活域结合蛋白-1(JAB1)是COP9信号小体(CSN)的亚基5。本文中我们对人源的JAB1基因进行了克隆载体和表达载体的构建,也验证了 OhMIF蛋白和JAB1蛋白的相互作用,通过抑制剂ISO-1的处理后,OhMIF与JAB1蛋白的相互结合能力也产生了明显的减弱。
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