赤瓟块根和果实营养成分的测定及其多糖的提取分离工艺研究

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赤瓟(Thladiantha dubia Bunge.)为葫芦科赤瓟属多年生草本植物,蒙文名称闹海音-浩葛。赤匏果实入药,具有和血调经、止血、消肿等功效,主治下死胎、月经不调和子宫出血等病症。内蒙古赤峰、呼伦贝尔等地把赤瓟作为野菜食用的记载。赤匏块根具有味苦、性寒等特征,民间常用的食用方法有蒸、煮和烤熟等。目前赤瓟的研究主要围绕于果实的药用有效成分和临床药理学方面,而对赤瓟营养成分的报道却几乎没有。本文首先研究赤瓟块根主要营养成分和微量元素,其次研究其主要营养成分多糖的提取、分离纯化工艺,优化提取条件和纯化条件。最后比较研究块根和果实的多糖含量和抗氧化活性。以期为赤瓟的开发和利用提供理论基础。本课题研究的主要内容和结果:(1)赤瓟块根的主要营养成分和微量元素赤瓟块根的主要营养成分和微量元素含量的测定均采用国标法。通过实验研究发现,赤瓟块根富含多糖、淀粉及粗纤维等糖类物质;蛋白质、粗脂肪和粗灰分等成分的含量均较低。每100 g干物质中的各种营养成分的含量分别如下:淀粉25.8 g、粗纤维1.471 g、多糖40.7 g、可溶性总糖2.87 g、还原糖0.46 g、蛋白质0.458 mg、粗脂肪0.427 mg、总黄酮含量为50.1 mg、粗灰分含量为3.44 g。赤瓟块根中富含锌、铁、镁、锰、钙元素,却不含有铜元素。每100 g干物质中的各种微量元素的含量分别如下:锌(Zn)353.34μg、铁(Fe)591.64μg、镁(Mg)1018.01μg、锰(Mn)10.24μg、钙(Ca)461.05μg。(2)水法和酶法提取赤瓟块根多糖采用水提取法提取赤瓟块根多糖的过程中,提取时间、提取温度、料液比和提取次数等因素是影响提取率的主要因素。在测定其这些因素对多糖提取率的基础之上,进行优化正交实验确定最佳提取条件。水提取法提取赤瓟块根多糖的最优提取条件为:提取温度90℃、料液比为1:20、提取时间1.5 h。在此实验的条件下提取得到的赤瓟块根多糖提取率为可达到45.16%。采用酶辅助提取法提取赤瓟块根多糖的过程中,加酶量、酶提取温度、酶提取时间、浸提液p H等是影响提取率的主要因素。在测定其这些因素对多糖提取率的影响力的基础之上,进行正交优化实验确定最佳提取条件。酶辅助提取赤瓟块根多糖的最优提取条件为:酶解温度60℃、加酶量0.5%、p H值6.0、酶解时间为1 h。在此实验的条件下提取得到的赤瓟块根多糖提取率可达到74.62%。酶辅助提取法获得的多糖提取率(74.62%)显著高于水提取法获得的多糖提取率(45.16%)。在本研究优化的提取条件下,分别测定赤瓟块根和果实多糖含量,发现赤瓟果实的多糖含量(0.393 mg/g干物质)高于赤瓟块根多糖含量(0.299 mg/g干物质)。(3)赤瓟块根多糖和果实多糖的分离纯化采用DEAE-52纤维素柱层析法分别对sevage法去除蛋白质以后的赤瓟块根粗多糖(TDP1)和果实粗多糖(TDP2)进行初步的分离纯化研究。分离纯化得到的结果可知,赤瓟块根多糖的DEAE-52纤维素层析得到的溶液有两种大小不一样的洗脱峰,其中第一个峰是蒸馏水洗脱得到的中性多糖组分(TDP1-1),此洗脱峰比较高且面积大,表明块根多糖富含中性多糖成分。第二个峰是用0.1M Na Cl溶液洗脱得到的酸性多糖组分(TDP1-2),此洗脱峰比较低且面积小,说明块根多糖中酸性多糖组分极少,进一步纯化过程中忽略。因此在赤瓟块根多糖中的中性多糖成分的含量很高,而含有的酸性多糖则含量很低。采用DEAE-52纤维素柱层析法对赤瓟果实多糖进行初步的分离纯化研究。研究结果可知,赤瓟果实多糖的层析以后的溶液只有单一的洗脱峰,此洗脱峰溶液是蒸馏水洗脱得到的中性多糖成分,却没有氯化钠洗脱出来的多糖洗脱峰,也就是说,不含酸性多糖组分。色谱曲线中中性多糖峰较高且面积大,表明果实多糖富含中性多糖成分。进一步用Sephadex G-150柱层析以后的赤瓟块根和果实中的多糖的分离纯化的结果是出现唯一的多糖洗脱峰,这均是蒸馏水洗脱得到的多糖组分。因为Sephadex G-150柱层析洗脱以后得到一个洗脱峰,因此纤维素层析后的中性多糖是均一性多糖。(4)赤瓟块根多糖和果实多糖的抗氧化活性研究采用分光光度法测定其赤瓟块根多糖和果实多糖对羟基自由基的清除能力和超氧阴离子自由基的清除能力的影响力。研究结果发现,块根多糖和果实多糖均具备抗自由基能力。赤瓟块根多糖和果实多糖对羟基自由基的清除能力不同,按清除能力的大小顺序排列是:维生素C>TDP2-1>TDP1-1。DEAE-52纤维素层析获得的赤瓟果实多糖和块根多糖的清除能力进行比较的话,果实多糖的羟基自由基的清除能力强于块根多糖,并且等于相同浓度的维生素C清除能力的77%。赤瓟块根多糖和果实多糖对超氧阴离子自由基的清除能力不同,按清除能力的大小顺序排列是:维生素C>TDP2-1>TDP1-1。DEAE-52纤维素层析获得的赤瓟果实多糖和块根多糖的清除能力进行比较的话,果实多糖的超氧阴离子自由基的清除能力强于块根多糖,并且等于相同浓度的维生素C清除能力的70%。
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