睫状神经营并因于mRNA 在脊髓损伤中的表达 及其对脊髓损伤的保护作用的实验研究 脊髓损伤是一类后果严重的常见损伤，给社会和家庭带来沉重的精神和经济负 担。脊髓损伤后如何恢复其神经功能一直是医学专家努力探索的重点。近年来研究 发现，睫状神经营养因子（Ciliary Neurotrophic Factor， CNTF）对体外培养的多种神 经元具有营养作用，可以促进多种神经元的存活，包括感觉，运动，交感和副交感 神经元。周围神经损伤后，睫状神经营养因子对多种神经元具有不同程度的保护和 促进其再生作用。但对其在脊髓损伤中的作用如何研究甚少。本课题在这一方面作 了一些研究。 本研究应用多种实验技术和方法，旨在阐明二个问题：（1）CNTF是否介入了 脊髓损伤，其在脊髓损伤后的InRNA表达变化如何？（2）CNTF是否能够保护脊 髓神经元，其可能作用机制是什么？最终目的是从整体、细胞和分子水平探讨CNTF 对实验性脊髓损伤大鼠脊髓神经元的保护作用及机理，为临床应用外源性神经营养 因子治疗脊髓损伤提供一定的实验依据。 本实验的主羹珐果和结论： 1．动物模型的建立 采用较接近人类脊髓损伤的模型－Aellen氏重物坠落（Weight Drop，WD）法脊 髓损伤模型致大鼠脊髓T8中度损伤。脊髓损伤成功后，采用Yaksh法行蛛网膜下 腔置管。各组于术后同时间注入等体积的CNTF或生理盐水，按实验设计定期处死 动物，进行各项指标测定。 2．损伤大鼠脊髓CNTFmRNA表达的变化 按试剂盒说明书对标本进行RNA抽提和RT－PCR扩增，扩增产物进行凝胶电 泳，最后行计算机扫描密度定量。结果发现，对照组大鼠脊髓CNTFmRNA呈现低 表达，在脊髓损伤后CNTFmRNA的表达持续增高，至伤后3天，其表达达到高峰， －2－ ＿——％———— 与对照组相比均有显著性差异。 3．CNll7对损伤脊髓神经元数目、乙 碱酯酶及酸性磷酸酶含量的影响 取伤段脊阮组织行Ni881染色检查，将尼氏染色切片进行计算机扫描，用电阉 和图像分析软件进行囹像采集和处理，测量神经元的数目。将冷冻伤段脊瞩组织匀 浆后，按试剂盒说明书进行AchE和ACP含量测定。结果显示：损伤后脊回神经元 数目显著减少、As含量持续下降、ACP含量升高；给予外源性Ci后神经元 数目显著增加、AchE含量下降援慢、ACP含量上升较缓，与正常对照组及生理盐 水组相比，均有显著性差异。 4．CNTF对损伤脊鹏组织含水量、局部离子含量的影响 取伤段脊回组织称取湿重，＃后将标本置于烘箱中烘于并称取干重，按mott 公式计算脊鹏含水量。将干燥标本消化后，稀释并测定溶液中Na、K＋、Caf＼Mgl” 浓度（呶Inl人再换算成每克干重脊瞩组织中离子含量（p切口叱drywt人结果表明： 损伤组伤后伤区脊问组织含水量较对照组增加非常显著，Na＋、CaZ“含量均显著增加， K＋、p含量均降低（p＜ 0刀1入给予外源性 C灿后伤区组织含水量明显下降（p＜ 0刀1人M、CaZ”含量较伤后有明显下降，同时，K＋、Mgl”含量也有明显回升（卜0刀1人 但仍明显高于对照组。 通过对大鼠脊回损伤前后组织中的CNyMA含量的测定，发现其在脊回损 伤后呈现高表达，表明CNIT在脊瞩损伤的修复过程中具有重要的作用；给予外源 性的CNTF后，能够反应脊囚神经功能状态的乙酞胆碱酯酶和酸性磷酸酶的含量及 脊瞩创伤性水肿均较损伤组有显著性改菩，说明CNTF对脊回神经元具有保护作用； 进一步研究表明CNTF可能踞过稳定损伤局部细胞内外离子平衡来起到保护脊回 神经元的作用的。