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背景:在我国各类癌症中,胃癌在男女性发病率与死亡率均位居前五位。由于胃癌早期筛查普及率不高,多数患者因未得到早期发现及诊治,就诊时已处于进展期,因而寻找有效的治疗胃癌的药物靶点极其重要。质子泵抑制剂广泛用于酸相关疾病的治疗,但近年来发现其在胃癌的治疗方面也具有一定的应用价值,但仍颇具争议。端粒酶作为生物细胞中一种重要的逆转录酶,它能够维持端粒的长度,使细胞无限制的增殖,导致肿瘤的发生发展。在端粒酶的组成成分中,端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcription,TERT)具有调控端粒酶活性的重要作用,90%以上的恶性肿瘤细胞中都高表达TERT基因,通过其逆转录酶活性促进肿瘤无限增殖。目的:本研究拟通过体内体外实验,观察质子泵抑制剂(泮托拉唑)对胃癌细胞中TERT基因表达的影响,阐明质子泵抑制剂通过调控TERT的表达来抑制胃癌细胞的侵袭性,为在以TERT为靶点的胃癌的治疗上提供新的思路及理论依据。方法:以胃癌细胞AGS、HGC27为研究对象,利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western Blot)观察胃癌细胞在接受泮托拉唑处理后,细胞内TERT的表达情况的变化。应用质粒构建技术,构建TERT启动子载体质粒,在胃癌细胞内转染进不同截断的TERT基因质粒载体,并接受泮托拉唑处理后,应用报告基因实验检测。Western Blot检测接受泮托拉唑处理后β-catenin的表达量,及上皮间质转化标志蛋白的表达变化。应用基因过表达技术,过表达TERT基因的表达,Western Blot检测过表达效果。Transwell迁移实验比较对照组与过表达TERT组胃癌细胞经泮托拉唑处理之后的迁移能力的变化,Western Blot检测并比较两组细胞上皮间质转化标志蛋白的表达变化。动物实验研究以HGC27为研究对象,BALB/c裸鼠为宿主动物,尾静脉注射建立胃癌肺转移瘤模型,待造模成功后,使用泮托拉唑灌胃治疗,待治疗结束后取裸鼠肺脏组织,观察对照组与处理组肺部有无转移结节,并进行常规病理切片HE染色,在光镜下观察肿瘤形态学变化。结果:经质子泵抑制剂(泮托拉唑)处理后,在蛋白水平及mRNA水平上均下调了胃癌细胞中TERT基因的表达(P<0.05)。萤光素酶报告基因检测发现泮托拉唑能够降低TERT基因上游3790bp处的启动子活性(P<0.05),考虑TERT受泮托拉唑调控的启动子区域位于TERT基因上游2089bp～3790bp之间,通过数据库检索预测在此区域内可能与TERT启动子相结合的转录因子为STAT3,继而再利用荧光素酶报告基因检测发现经泮托拉唑处理后能够降低TERT基因启动子上游未突变的3790bp区域处的活性(P<0.05),而TERT启动子上游3790bp处定点突变的区域的活性未受到影响,同时发现泮托拉唑能够下调细胞内总STAT3与磷酸化STAT3在蛋白水平的表达量(P<0.05)。此外,发现经泮托拉唑处理后,能够下调胃癌细胞内β-catenin以及间质标志物N-cadherin、vimentin、snail在蛋白水平的表达(P<0.05),并且上调了上皮标志物E-cadherin的表达量。随后,在胃癌细胞中过表达TERT基因,并经泮托拉唑处理后,利用Transwell迁移实验,发现与阴性对照GFP组相比,过表达TERT组的胃癌细胞穿过滤孔膜到达下室的细胞数明显增加(P<0.05),细胞迁移能力增强。进而通过western blot检测发现在胃癌细胞中过表达TERT能够上调间质标志物N-cadherin、vimentin及snail在蛋白水平的表达,并且下调了上皮标志物E-cadherin的表达(P<0.05)。体内实验中比较HGC27肺转移瘤模型中对照组与给药组肺脏组织转移结节,肉眼观察可见对照组肺脏组织上存在半透明样转移结节。HE切片光镜下观察发现相较于给药组,对照组可见明显转移灶。结论:质子泵抑制剂(泮托拉唑)能够通过抑制胃癌细胞中STAT3与TERT基因启动子的结合进而抑制TERT基因的表达。同时,泮托拉唑能够通过调控Wnt/β-catenin通路,抑制胃癌细胞上皮间质转化,减弱胃癌细胞的侵袭与迁移能力。但是,在胃癌细胞中过表达TERT基因后能够部分逆转质子泵抑制剂对胃癌细胞迁移能力。因此,我们认为质子泵抑制剂通过调控TERT基因的表达,从而抑制胃癌的侵袭与迁移能力,这可能是胃癌治疗的一个潜在新靶点。