补肾活血方联合骨髓间充质干细胞治疗大鼠子宫内膜损伤的实验研究

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:crystal_zirui
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
第一部分 大鼠宫腔粘连模型的建立与稳定性评估目的:制备稳定的实验性宫腔粘连(IUAs)大鼠模型。方法:1选取36只动情期SD大鼠进行造模,分为三组,每组12只:(1)化学损伤组:0.5ml95%乙醇分别灌注双侧宫角5min后吸出。(2)双重损伤组:微型刮匙搔刮两侧宫角,后将细菌脂多糖(LPS)棉线置于宫腔内。(3)假手术组:仅行开关腹手术。2在术后7d,14d,21d分别处死各组SD大鼠4只,取材子宫,并通过HE及Masson染色,测量其子宫内膜的腺体数量、厚度及纤维化面积,免疫组织化学法检测MMP-9和VEGF在SD大鼠子宫内膜中的表达水平。结果:1.HE染色和Masson染色:(1)化学损伤组:损伤7 d时,细胞破裂失去正常形态,伴见部分组织出现纤维增生粘连带;损伤14d及21d时,可观察到宫腔组织呈修复趋势。(2)双重损伤组:模型制备7d后,可见内膜上皮线完整性受损,伴见组织剥脱,碎片散落于体积缩小的宫腔内,粘连带出现,并见增生现象,损伤14d及21d时,内膜镜下与7d无明显差异,仅表现为纤维程度进行性加重,宫腔体积持续缩小且其内可见粘连带面积增加。2.病理形态学指标:(1)腺体个数:造模7d后和造模14天后,均发现假手术组腺体个数多于化学损伤组和双重损伤组,造模21d后,化学损伤组和假手术组腺体个数多于双重损伤组。(2)子宫内膜厚度:造模后7d,造模后14d,造模后21d时,均发现假手术组内膜厚度厚于化学损伤组和双重损伤组。(3)纤维化面积:造模后7d,造模后14d,造模后21d时,均发现双重损伤组纤维化程度重于化学损伤组和假手术组。3.MMP9表达:造模后7d和造模后14d时,假手术组表达显著于化学损伤组和双重损伤组;造模后21d时,假手术组和化学损伤组表达显著于双重损伤组。4.VEGF表达:造模后7d时,化学损伤组和双重损伤组显著表达多于假手术组,同时,双重损伤组多于化学损伤组;造模后14d和造模后21d时,均为化学损伤组和双重损伤组表达显著于假手术组。结论:1 95%乙醇及刮宫+LPS感染两种造模方法均可损伤子宫内膜造成宫腔粘连。2机械+感染因素所致的双重损伤方法建造的模型具有更高的稳定性,亦更贴近宫腔粘连的临床表现,因此成为后续补肾活血方与骨髓间充质干细胞治疗宫腔粘连的理想动物模型。第二部分补肾活血方联合BMSCs治疗IUAs的疗效评价目的:研究补肾活血方联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)原位移植对于宫腔粘连SD大鼠子宫内膜的影响。方法:1选取50只SD雌鼠基于第一部分稳定性高的双重损伤法造模,造模7天后实施不同治疗方案。2治疗方案分组:(1)模型组:造模7天后,连续灌胃生理盐水2ml15天;(2)补佳乐组:造模7天后,连续灌胃补佳乐混悬液2ml15天;(3)补肾活血组(BSHX组):造模7天后,连续灌胃BSHX方混悬液2ml15天;(4)骨髓间充质干细胞组(BMSCs组):造模7天后,连续灌胃生理盐水2ml天,第10天时,麻醉后开腹沿宫角纵轴肌壁间注射BMSCs混悬液1ml;(5)中药+BMSCs组:造模7天后,连续灌胃BSHX方混悬液2ml15天,于灌胃第10天,麻醉后开腹沿宫角纵轴肌壁间注射BMSCs混悬液1ml。并于治疗结束后的第5天将所有雌鼠与雄鼠以3:1的比例合笼,受精后7d处死所有老鼠取子宫标本。3子宫标本进行以下检测:(1)HE染色法,记录各组子宫形态及腺体数量,测量内膜厚度。Masson染色法,测量各组内膜纤维化程度。(2)PCR检测MMP-9、VEGF水平的表达。(3)免疫组织化学检测MMP-9、VEGF的表达。(4)记录各组子宫妊娠数量。结果:1病理形态学变化:(1)HE染色和Masson染色:模型组的内膜、宫腔等变化同第一部分所述内容相似,而治疗组均可见内膜修复现象,其中以补佳乐组和补肾活血组(BSHX组)改善最为明显,骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)组的改善最微弱。(2)腺体个数:补肾活血组(BSHX组)、骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)和中药+BMSCs组多于补佳乐组,骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)和中药+BMSCs组少于补肾活血组(BSHX组),同时,骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)少于中药+BMSCs组;(3)内膜厚度:治疗组最终测量结果皆较模型组为厚,骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)和中药+BMSCs组小于补佳乐组和补肾活血组(BSHX组)。(4)纤维化面积:补佳乐组、骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)及中药+BMSCs组均大于补肾活血组(BSHX组);补佳乐组和中药+BMSCs组均小于骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)。2 PCR结果(1)MMP-9表达:补佳乐组高于骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)和中药+BMSCs组;骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)和中药+BMSCs组低于补肾活血组(BSHX组),同时骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)低于中药+BMSCs组。(2)VEGF表达:骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)高于补佳乐组、补肾活血组(BSHX组)和中药+BMSCs组。3免疫组化结果(1)MMP-9表达:补肾活血组(BSHX组)、骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)和中药+BMSCs组明显低于补佳乐组;骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)低于中药+BMSCs组和补肾活血组(BSHX组)。(2)VEGF表达:骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)和中药+BMSCs组高于补佳乐组;补佳乐组、骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)和中药+BMSCs组均高于补肾活血组(BSHX组);骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)高于中药+BMSCs组。4子宫角妊娠数量补肾活血组(BSHX组)和中药+BMSCs组多于补佳乐组;骨髓间充质干细胞组(BMSCs组)少于补佳乐组、补肾活血组(BSHX组)和中药+BMSCs组。结论:1 BSHX方灌胃联合BMSCs移植的治疗方法,可一定程度改善子宫内膜的厚度,促进内膜腺体再生,提高妊娠率,其综合效果与单独使用BSHX方灌胃差异不大。2补肾活血方可改善子宫内膜粘连情况,减少纤维化增生,刺激子宫内膜增厚,增强内膜容受性,最终提高妊娠率。3 BMSCs原位移植方法对于子宫内膜的改善无显著作用。可能由于子宫肌壁间注射的移植方式对内膜再次造成损伤,致其综合疗效欠佳。
其他文献
目的:(1)以人神经胶质母细胞瘤U251细胞裸鼠皮下荷瘤模型为研究对象,研究不同浓度的脑瘤一号方(GD-1)联合替莫唑胺(TMZ)对U251细胞产生的效果,对照观察GD-1联合TMZ对裸鼠U251皮下荷瘤模型及YAP1分子、Wnt/β-catenin信号通路和MGMT在基因及蛋白层面的表达的影响。(2)沉默人神经胶质瘤U251细胞中YAP1的表达,观察Wnt/β-catenin通路相关分子及MGM
学位
目的:证实红景天苷治疗胆汁淤积性肝纤维化的疗效,并且在动物实验和细胞层面探讨红景天苷的作用机制。方法:采用来自朱慧博士实验的正常组、BDL(Bile Duct Ligation,BDL)模型组、红景天苷组大鼠的肝组织。用蛋白免疫印迹法检测α-SMA(α-Smooth Muscle Actin,α-SMA)、CK7(Cytokeratin 7,CK7),q PCR法检测Col.Ⅰ(Collagen
学位
随着工业化进程的发展,空气污染问题日益凸出,人们也越来越重视对环境气体质量和成分、浓度的监测工作。气体传感器是一类对气体成分敏感并能够将其转换为电信号进行监测的装置,其在工业安全、医疗诊断、醉酒驾驶、家居装潢和空气质量监测等领域有广阔的应用前景。半导体金属氧化物型气体传感器是目前研究较多和应用较为普遍的一种气体传感器,具有使用方便、响应速度快、设备小型化、成本低廉和制备工艺简单等优点,但仍存在工作
学位
目的:研究灵猫方水提物通过调节干扰素表达和细胞自噬抑制HBV复制细胞模型的HBs Ag、HBe Ag和HBV DNA表达的机制。方法:1.灵猫方水提物对HBV复制细胞模型干扰素表达的调节作用:(1)制备灵猫方水提物。(2)建立HBV复制细胞模型:将p HBV1.3-p CR2.1质粒分别转染至Hep G2和Huh7细胞,CCK-8法测定细胞存活率;ELISA法检测HBe Ag和HBs Ag的表达水
学位
目的:明确灵猫方治疗慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)的优势环节;探讨灵猫方通过改善Bcl-6/Blimp-1表达的平衡促进Tfh细胞的分化及其对B细胞亚群分化的调节治疗CHB的免疫机制。方法:1.灵猫方治疗CHB的临床疗效:(1)开展历史前瞻性队列研究,纳入2016年6月-2019年6月在上海中医药大学附属曙光医院肝病科接受聚乙二醇干扰素α治疗的CHB患者285例。(
学位
研究目的:本研究通过观察补肾活血方对DOR小鼠卵泡发育、血清AMH和卵巢中PI3K、AKT、MTOR、p-PI3K、p-AKT、p-MTOR蛋白表达的影响,以阐明补肾活血方治疗DOR的有效机制,为DOR的机制研究和临床用药提供理论依据。研究方法:采用腹腔注射环磷酰胺造模法建立DOR小鼠模型。将36只7周龄的雌性BALB/c小鼠随机分为六组:正常组、模型组、西药组、中药低剂量组、中药中剂量组和中药高
学位
目的:通过对胸主动脉缩窄诱导的慢性心衰小鼠模型进行心脏超声检测来评价AACO复方防治慢性心力衰竭的疗效,运用网络药理学方法研究AACO复方防治慢性心力衰竭的作用机制,通过基因芯片检测基因表达谱分析差异基因,检测钙调控蛋白表达,验证网络药理学研究结果,深入研究AACO复方防治慢性心力衰竭的作用机制。方法:SPF级雄性C57BL/6小鼠40只,按随机数字表法取30只行胸主动脉缩窄术,分模型组10只、A
学位
目的本课题研究基于益气活血和化痰通络疗法,采用巨噬细胞源性泡沫细胞的模型,从调节脂质平衡角度的出发,探讨益气活血化痰方调脂抗动脉粥样硬化的作用机制,评价益气活血化痰方治疗冠心病的安全性和有效性,为益气活血化痰方的临床运用提供研究支持。方法(1)本实验采用PMA诱导THP-1分化为巨噬细胞,利用氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导 T
学位
背景与目的药物性肝损伤(drug-induced liver injury,DILI)是指由各类处方或非处方的化学药物、生物制剂、传统中药、天然药、保健药品、药膳食膳及其代谢产物等引发的肝损伤[1]。DILI是较严重和常见的药物不良反应之一,甚至可致肝衰竭或死亡[2]。据世界卫生组织统计,DILI排名全球死亡原因的前5位[3]。据统计目前我国DILI患者在肝病患者中占比1%~5%,在急性肝炎患者中
学位
基本动作技能是一系列专业、复杂运动技能的基础,根据功能的不同主要分为位移技能、操控技能和稳定技能。儿童在成长的过程中,如果没有适时掌握正确的动作模式,将会对后期复杂运动技能的学习产生很大的负面影响。行为自我调节是指儿童抑制冲动、调节自身行为并使之符合规范要求的能力。对于新入学的儿童这种能力至关重要,它能使儿童更好地遵守学校规定、适应集体生活,同时对其学业成绩也有很大的促进作用。目前儿童行为自我调节
学位