【摘 要】
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马铃薯黄萎病是一种常见的真菌性病害,亦被称为马铃薯早死病,病原菌一旦侵染植株会逐步扩展到各个部位,严重影响其正常生长。目前,现有的杀菌剂均未被发现可有效控制此类病害发生,而对于抗病基因的相关研究也较为匮乏。因此,深入发掘抗性基因并加以利用、加快抗病品种的选育进程将成为其最有效的防治手段,且具有深远的意义。本研究主要利用马铃薯二倍体材料C545和V67为亲本,构建BC1后代分离群体作为后续遗传定位的
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马铃薯黄萎病是一种常见的真菌性病害,亦被称为马铃薯早死病,病原菌一旦侵染植株会逐步扩展到各个部位,严重影响其正常生长。目前,现有的杀菌剂均未被发现可有效控制此类病害发生,而对于抗病基因的相关研究也较为匮乏。因此,深入发掘抗性基因并加以利用、加快抗病品种的选育进程将成为其最有效的防治手段,且具有深远的意义。本研究主要利用马铃薯二倍体材料C545和V67为亲本,构建BC1后代分离群体作为后续遗传定位的基础,在前期对目的基因完成初定位的基础上,主要得到以下结果:1.后代群体构建与连锁标记开发:通过抗感亲本杂交共得到287份扩大的BC1群体材料,用于重组单株筛选。结合前期BSA测序数据在5号染色体初定位区间内共设计69对In Del引物,在分离群体中进行t测验后筛选出13对与黄萎病抗性连锁的In Del标记。2.重组单株筛选及目的基因精细定位:利用已开发的连锁标记从共计375份群体材料中筛选出20个重组单株,并对在初定位区间内部发生交换的5个单株进行多轮浸根接种试验确定其表型。结合重组单株的基因型及表型信息,将候选区间由1.7 Mb缩小至238 kb,并进一步加密连锁遗传图谱。3.候选基因分析:对亲本及部分抗感后代材料在病菌接种前后的三个时间点（0 h、6 h、12 h）根部样品取样进行RNA-seq。根据测序结果及后续定量试验验证,在候选区间内初步确定了一个和抗性相关的候选基因Soltu.DM.05G005120。4.超表达载体构建:针对该候选基因设计相关引物,在亲本及抗感后代中对其进行扩增发现其在抗感材料中有较为一致的序列差异,分别以差异的CDS序列构建超表达载体进行后续的转基因功能验证及相关的机制研究。
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