【摘 要】
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第一部分:miR-21-5p调控PTEN/MMP-2参与心房成纤维细胞增殖活化的实验研究。研究目的:体外层面,初步探讨MicroRNA-21-5p（miR-21-5p）调控PTEN/基质金属蛋白蛋白酶2（MMP-2）参与心房成纤维细胞的增殖活化的作用和可能机制。研究方法:选用大鼠乳鼠原代心房成纤维细胞（AFs）为研究对象,培养至第三代后分为正常培养组（NC组）、转化生长因子组（TGF组）、miR-
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第一部分:miR-21-5p调控PTEN/MMP-2参与心房成纤维细胞增殖活化的实验研究。研究目的:体外层面,初步探讨MicroRNA-21-5p（miR-21-5p）调控PTEN/基质金属蛋白蛋白酶2（MMP-2）参与心房成纤维细胞的增殖活化的作用和可能机制。研究方法:选用大鼠乳鼠原代心房成纤维细胞（AFs）为研究对象,培养至第三代后分为正常培养组（NC组）、转化生长因子组（TGF组）、miR-21-5p空载慢病毒组（空载慢病毒组）、miR-21-5p沉默组（慢病毒组）。NC组正常培养,TGF组加入10nM TGF-β1刺激24h,空载慢病毒组加入10nM TGF-β1刺激24h后,转染miR-21-5p空载慢病毒,空载慢病毒无沉默作用,慢病毒组加入10nM TGF-β1刺激24h后,转染miR-21-5p沉默慢病毒。干预后在荧光显微镜下观察细胞病毒转染效果,应用qRT-PCR测定细胞miR-21-5p的表达水平,应用Western blot检测细胞中PTEN、MMP-2表达水平的变化。研究结果:1.TGF组、空载慢病毒组较NC组具有更高的细胞增殖活性,慢病毒组的细胞增殖活性低于TGF组及空载慢病毒组。2.慢病毒成功转染细胞后,qRT-PCR测定TGF组及空载慢病毒组miR-21-5p的表达量明显高于NC组,慢病毒组miR-21-5p的表达量低于TGF组及空载慢病毒组。3.TGF组、空载慢病毒组较NC组的PTEN表达量明显下降,慢病毒组较TGF组、空载慢病毒组PTEN表达量明显上升。TGF组、空载慢病毒组较NC组的MMP-2表达量明显上升,慢病毒组较TGF组、空载慢病毒组MMP-2的表达量明显下降。结论:1.TGF-β1可诱导AFs增殖活化。2.阻滞miR-21-5p可以减弱TGF-β1预处理的AFs的增殖活化。3.miR-21-5p或通过调控PTEN/MMP-2的表达影响AFs的增殖活化。第二部分:miR-21-5p调控PTEN/MMP-2对SHR心房纤维化的影响。研究目的:在体层面观察miR-21-5p调控PTEN/MMP-2对自发性高血压大鼠（SHR）心房纤维化的影响,探索可能机制。研究方法:体内实验选取28周的大鼠为实验对象,5只WKY鼠为WKY组,15只SHR鼠随机分为SHR组、miR-21-5p空载腺相关病毒组（空载aav组）、miR-21-5p腺相关病毒沉默组（aav组）,每组5只。WKY组、SHR组尾静脉注射500ul 0.9%生理盐水,空载aav组尾静脉注射500ul空载腺相关病毒,总量为5E+10v.g,aav组尾静脉注射500ul miR-21-5p-sponges腺相关病毒,总量为5E+10v.g。干预3周后取大鼠心房组织,应用qRT-PCR测定每组大鼠心房组织miR-21-5p表达水平,应用Western blot检测组织中PTEN、MMP-2表达水平的变化,应用HE、Masson染色观察心房组织间质胶原增生及心房纤维化情况。研究结果:1.实验动物一般情况:SHR组、aav组及空载aav组大鼠的血压及心脏重量明显高于WKY,三组间血压及心脏重量无显著差异。2.HE染色:SHR组、空载aav组较WKY组心肌细胞排列紊乱,细胞增大,可见成纤维细胞增生,aav组较SHR组心肌细胞排列相对整齐,细胞大小趋于正常,成纤维细胞增生减少。3.Masson染色:SHR组、空载aav组较WKY组心房组织间质胶原纤维沉积明显增加,纤维化面积比增加,提示纤维化程度更为严重,aav组较SHR组及空载aav组胶原纤维含量减少,纤维化面积比减少。4.qRT-PCR测定:SHR组、空载aav组miR-21-5p的表达量明显高于WKY组,aav组miR-21-5p的表达量低于SHR组及空载aav组。5.Western blot测定:WKY组PTEN的表达量较高,SHR组及空载aav组PTEN的表达量明显降低,aav组的PTEN的表达量较SHR组及空载aav组升高。SHR组、空载aav组较WKY组的MMP-2表达量明显上升,aav组较SHR组及空载aav组MMP-2的表达量明显下降。结论:1.28周龄高血压大鼠心房纤维化显著,下调miR-21-5p表达可减轻上述改变。2.miR-21-5p或可通过调控PTEN/MMP-2的表达从而减轻高血压大鼠的心房纤维化。
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