【摘 要】
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蜡样芽孢杆菌是一种兼性厌氧的食源性条件致病菌,可引起恶心、呕吐、腹胀、腹痛及腹泻等疾病,由其引起的食物中毒在我国位居第三位。由于芽孢具有较强的耐受性,传统食品抑菌方法往往不能够消除蜡样芽孢杆菌的污染,因此,在食品工业中开发针对该菌有效、安全的防控手段和准确、快速定量检测的方法意义重大。噬菌体具有特异性强、分离成本低、安全性高的优点,有望成为防控此类食源性致病菌的理想手段。本论文对实验室保存的三株蜡
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蜡样芽孢杆菌是一种兼性厌氧的食源性条件致病菌,可引起恶心、呕吐、腹胀、腹痛及腹泻等疾病,由其引起的食物中毒在我国位居第三位。由于芽孢具有较强的耐受性,传统食品抑菌方法往往不能够消除蜡样芽孢杆菌的污染,因此,在食品工业中开发针对该菌有效、安全的防控手段和准确、快速定量检测的方法意义重大。噬菌体具有特异性强、分离成本低、安全性高的优点,有望成为防控此类食源性致病菌的理想手段。本论文对实验室保存的三株蜡样芽孢杆菌噬菌体进行了基本的生物学特性研究,在此基础上,配制了噬菌体鸡尾酒制剂,并对三株噬菌体单独及鸡尾酒制剂抑制蜡样芽孢杆菌生物膜形成,以及在牛乳、生鲜猪肉和米饭中防控蜡样芽孢杆菌的效果进行了评估,实验结果如下:噬菌体LY3、LY32和LY3W均能形成清晰透亮的噬菌斑,其中LY3W噬菌斑具有晕圈。噬菌体LY3、LY32、LY3W的最佳感染复数分别为0.00001、0.001、1,效价分别为4.24×1010PFU/m L、4.4×1010PFU/m L、1.24×1010PFU/m L.一步生长曲线测定表明LY3潜伏期10min,裂解期为40min,平均裂解量为28 PFU/cell,LY32潜伏期10min,裂解期80min,平均裂解量为89 PFU/cell,LY3W潜伏期20min,裂解期60min,平均裂解量为71 PFU/cell。环境耐受性实验结果表明三株噬菌体均具有较强的温度及酸碱耐受性,在30-50℃,p H 3-9的范围内均能保持较高的活性。测序结果表明LY3、LY32和LY3W基因组大小分别为46341bp、48648bp,25255bp,三株噬菌体均不含有毒力基因和可转移的抗药性基因。良好的生物学特性是噬菌体应用的基础,上述结果表明这三株噬菌体均具备应用的潜力和安全的生物学基础。三株噬菌体单独及鸡尾酒制剂抑制生物膜形成实验结果表明噬菌体鸡尾酒制剂抑制菌膜形成能力要强于任意单株噬菌体,单株噬菌体中LY3抑制菌膜形成的能力最强;在人工污染的牛乳、生鲜猪肉、米饭抑菌效果结果表明:三株噬菌体单独使用及混合鸡尾酒均能有效的降低宿主菌数量,LY32和LY3杀菌效果明显强于LY3W,噬菌体混合鸡尾酒制剂灭菌的效力优于任意单株噬菌体且能有效的防止抗噬菌体菌株的产生。在三种食品中噬菌体均呈现出MOI越大效力越高的特性。经噬菌体处理后,与4℃相比,25℃下细菌数量减少更多,但4℃低温与噬菌体可形成栅栏效应,细菌再生能力明显减弱。综上所述,本研究所使用的噬菌体及噬菌体鸡尾酒制剂能对食物中蜡样芽孢杆菌污染进行很好的生物防治,是一种很有前景的绿色天然的食品抗菌剂。
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