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目的:探究粪菌移植对脓毒症肠屏障损伤的作用及机制。方法:1.研究脓毒症情况下肠屏障的改变:建立脓毒症小鼠模型及LPS诱导的Caco-2细胞体外脓毒症模型,细胞实验PCR-PAG、Real-time PCR、Western Blot筛选HD AC基因及实验浓度,Western Blot、Real-time PCR检测HDAC1、紧密连接蛋白ZO-1、IL-1β、TNF-α的表达水平,Nanodrop 2000分光光度计检测FD-40通过单层Caco-2细胞的速率,观察单层细胞通透性的改变。动物实验HE染色检测各实验组的肠道标本形态学变化,免疫组化、Real-time PCR检测HDAC1、紧密连接蛋白ZO-1、IL-1 β、TNF-α的表达水平,Nanodrop2000分光光度计检测FD-40通过肠屏障的速率。2.明确HDAC是否参与脓毒症肠屏障功能的调控,及粪菌移植在其中的作用:细胞实验中LPS处理后的Caco-2细胞加入外源性重组HDAC拮抗剂（古曲霉素,TSA）或粪菌液共培养,检测紧密连接蛋白ZO-1、HDAC1、IL-1β、TNF-α的表达水平,以及单层细胞通透性的改变。动物实验通过灌胃不同处理后的小鼠粪菌液,检测HDAC1、ZO-1、IL-1β、TNF-α表达变化及肠屏障功能变化。3.研究HDAC与粪菌移植调控脓毒症肠屏障功能的分子机制:在第二部分的基础上,体内外予以外源性重组HDAC拮抗剂或小鼠粪菌液,检测巨噬细胞极化及下游分子BMP7的激活水平,探讨是否参与脓毒症肠屏障功能的调控。结果:1.肠上皮细胞株Caco-2用不同浓度LPS处理后,各实验组HDAC1的mRNA表达水平明显高于HDAC2,LPS浓度在100ng/ml、500ng/ml时,紧密连接ZO-1蛋白表达明显减少,HDAC1蛋白表达明显增多,FD-40 OD Ration明显增加。LPS诱导后,与对照组相比,HDAC1、IL-1 β、TNF-α、FD-40 OD Ration明显增加,ZO-1减少。小鼠予以CLP造模后,Sepsis组粘膜仅存固有层或固有层崩解,与Sham组比较,Sepsis组HDAC1蛋白在绒毛及基底组织中表达明显增加,ZO-1蛋白表达减少,IL-1β、TNF-α表达增多,FD-40 OD Ration明显增加。结果表明,脓毒症情况下,肠黏膜损伤严重,肠屏障功能严重受损。2.肠上皮细胞株Caco-2用LPS诱导后,予以TSA或粪菌液共培养,FMT+LPS处理后,与 LPS 组相比,HDAC1、IL-1β、TNF-α、FD-40 OD Ration 明显减少,ZO-1增多;TSA预处理后LPS组,与LPS组相比,ZO-1表达增多,HDAC1、IL-1β、TNF-α表达减少,FD-40 OD Ration明显减少。小鼠动物模型予以灌胃不同处理粪菌液,Sepsis+A-FMT组粘膜仅存固有层或固有层崩解,粘膜损伤Ⅳ-Ⅴ级;Sepsis+FMT组可见部分绒毛上皮,粘膜损伤Ⅱ-Ⅲ级;与Sepsis组比较,Sepsis+FMT组HDAC1蛋白在绒毛内表达减少,ZO-1蛋白表达明显增加,IL-1β、TNF-α表达减少,FD-40 OD Ration明显减少。结果表明,HDAC1在脓毒症肠屏障中肠屏障中起致炎作用,TSA起抗炎作用,而FMT通过HDAC1起着肠屏障保护作用,减轻sepsis相关肠粘膜损伤,降低小鼠的死亡风险。3.CLP造模后,Sepsis组及TSA预处理后,与对照组相比,极化成M1型巨噬细胞的巨噬细胞明显降低;TSA预处理LPS诱导后,与LPS组相比,极化成M1型巨噬细胞的巨噬细胞明显降低。与Sham组比较,Sepsis组CD86阳性点状红色荧光信号显著增强,CD206阳性点状绿色荧光信号减弱;与Sepsis组比较,Sepsis+FMT组CD86阳性点状红色荧光信号减弱,CD206阳性点状绿色荧光信号增强。Western Blot结果显示,TSA+LPS组比LPS组BMP-7的表达明显升高,HDAC1+LPS组较LPS组BMP-7表达降低。流式检测结果显示,FMT预处理LPS诱导后,与LPS组相比,极化成M1型巨噬细胞的巨噬细胞明显降低;BMP-7预处理LPS诱导后,与LPS组相比,极化成M1型巨噬细胞的巨噬细胞明显降低;Gremlin预处理LPS诱导后,与LPS组相比,极化成M1型巨噬细胞的巨噬细胞明显增加。结果表明,FMT介导HDAC1减少脓毒症肠屏障损伤,可能与抑制BMP-7和巨噬细胞M1型极化相关。结论:1.脓毒症情况下,HDAC1、IL-1 β、TNF-α、FD-40 OD Ration 增加,ZO-1表达减少,肠黏膜损伤严重,肠屏障功能严重受损。2.HDAC1在脓毒症肠屏障中肠屏障中起致炎作用,TSA起抗炎作用,而FMT通过HDAC1起着肠屏障保护作用,减轻sepsis相关肠粘膜损伤,降低小鼠的死亡风险。3.FMT介导HDAC1减少脓毒症肠屏障损伤,可能与抑制BMP-7和巨噬细胞M1型极化相关。