论文部分内容阅读
目的:餐后高血糖症(Isolated Post-challenge hyperglycaemia,IPH)是2型糖尿病(Type2 diabetes mellitus,T2DM)的一种类型,主要表现为空腹血糖正常(空腹血糖<6.0 mmol/L),而餐后血糖异常(餐后血糖≥11.1mmol/L)。流行病资料表明约40-50%的新诊断糖尿病患者属于IPH患者。但在一些常规体检中,IPH患者常常被漏诊。本研究通过对IPH患者血清游离脂肪酸谱和指纹图谱的代谢组学研究,寻找诊断IPH患者的生物标志物,为餐后高血糖症的早期诊断和早期预防提供理论依据。
方法:方法学实验:建立气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分析血清中游离脂肪酸测定方法。分别对水浴加热甲酯化反应条件和超声波辅助加热甲酯化反应条件进行优化,确定两种加热方式的最佳反应条件,对两种加热方式的精密度、回收率、线性范围和检出限进行研究。代谢组学实验:选取哈尔滨市居民155人,其中正常对照组50人,餐后高血糖症患者52人,糖尿病患者53人;对筛选人群进行基本资料调查,采集空腹血样并检测身高、体重、血压、血糖、血脂、胰岛素等指标;利用本研究建立的方法测定研究人群的血清游离脂肪酸谱,并利用UPLC-Q-TOF-MS技术测定研究人群的血清代谢指纹图谱,利用多变量统计分析方法对游离脂肪酸谱和血清代谢指纹图谱进行判别分析,从而确定诊断IPH患者的生物标志物。
结果:方法学实验:水浴加热脂肪酸甲酯化反应的最佳优化条件为:硫酸甲醇溶液浓度为10%,反应温度62℃,反应时间2 h;标准曲线的线性范围在0.9953-0.9999之间;日间和日内的变异系数在1.24-9.72%范围内,而日间和日内回收率在81.00-106.60%之间。超声波辅助加热脂肪酸甲酯化的最佳优化条件为:硫酸甲醇溶液浓度为10%,反应温度55℃,超生功率60 W,超声时间50 min;标准曲线的线性范围在0.9914-0.9998之间;日间和日内的变异系数在1.75-9.94%之间,而日间和日内回收率在85.32-112.11%之间。代谢组实验:方差分析结果显示,IPH患者血清中有12种脂肪酸均明显高于正常对照组(P<0.05);T2DM患者血清中15种脂肪酸均明显高于正常对照组(P<0.05);与T2DM患者相比,IPH患者血清中十六碳酸(C16:0)、十八碳酸(C18:0)、油酸(C18:1)、γ-亚麻酸(γ-C18:3)和亚麻酸(C18:3)显著降低(P<0.05)。多元统计分析结果显示:PLS-DA方法最佳分析模型为UV模型;PLS-DA的得分图表明正常、IPH和T2DM人群能够被明显分类,确定诊断IPH的生物标志物为油酸(C18:1),亚油酸(C18:2)和亚麻酸(C18:3)。UPLC-Q-TOF-MS检测结果表明三组人群的血清代谢指纹图谱存在差异性;PLS-DA的得分图表明正常、IPH和T2DM人群能够被明显分类;确定了诊断IPH患者的生物标志物,主要包括游离脂肪酸、磷脂类、甘油二酯、硫酸脱氢表雄酮和葡萄糖苷酸等。
结论:建立了检测血清中游离脂肪酸谱的GC-MS实验技术方法;基于GC-MS和UPLC-Q-TOF-MS技术建立了IPH患者的血清游离脂肪酸谱和血清指纹代谢谱;统计分析发现IPH患者的两种图谱与正常对照组和T2DM组具有明显差异性;通过PLS-DA方法进行变量筛选和分析,找到了诊断IPH患者有意义的生物标记物,主要包括油酸、亚油酸、磷脂类、甘油二酯、硫酸脱氢表雄酮和葡萄糖苷酸,这些标志物的确定为餐后高血糖症的早期发现和早期防治提供科学依据。