【摘 要】
:
目的:本课题通过昆虫杆状病毒系统构建柯萨奇病毒B组5型(Coxsackiecirus,CB5)病毒样颗粒疫苗。方法:1.将优化合成后的CB5 P1(前体蛋白)和3CD(编码病毒蛋白酶)基因插入质粒pOET5,获得重组质粒pOET5-P1-3CD,通过昆虫细胞-杆状病毒表达系统(flash BAC)表达含有CB5 P1和3CD基因的重组杆状病毒,并感染sf9昆虫细胞,表达CB5病毒样颗粒(Virus
【基金项目】
:
国家自然科学基金资助课题(81660280); 广西研究生教育创新计划项目(YCSW2019211);
论文部分内容阅读
目的:本课题通过昆虫杆状病毒系统构建柯萨奇病毒B组5型(Coxsackiecirus,CB5)病毒样颗粒疫苗。方法:1.将优化合成后的CB5 P1(前体蛋白)和3CD(编码病毒蛋白酶)基因插入质粒pOET5,获得重组质粒pOET5-P1-3CD,通过昆虫细胞-杆状病毒表达系统(flash BAC)表达含有CB5 P1和3CD基因的重组杆状病毒,并感染sf9昆虫细胞,表达CB5病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs),以Western Blot鉴定衣壳蛋白的表达,通过聚乙二醇沉淀法浓缩释放到细胞培养上清的CB5 VLPs,采用蔗糖梯度离心的方法纯化该浓缩液,以透射电镜观察VLPs的形态。2.6周龄BALB/c雌性小鼠每组6只,共4组;CB5 VLPs疫苗为实验组,CB5灭活疫苗为阳性对照,野生型杆状病毒为阴性对照,PBS为空白对照;辅以完全/不完全弗氏佐剂;分别对每只小鼠以10μg/次的剂量进行腹腔接种,Week0、Week2和Week4分别免疫一次,每次免疫前采集血清,分别于Week6和Week12从尾部取血,ELISA测定各组小鼠血清特异性IgG抗体水平,微量中和实验检测小鼠血清中针对CB5的中和抗体效价。3.6周龄ICR雌性小鼠每组2只,共4组;分组及免疫接种途径和剂量同方法2。分别对每只小鼠以10μg/0.1 ml的剂量进行皮下接种,Week0、Week2和Week4分别免疫一次。于Week3使母鼠交配,约Week6~7时分娩新生乳鼠,以10只1日龄乳鼠为一组;各组分别以50倍LD50的CB5鼠适应株颅内感染,持续观察15天并记录乳鼠存活率以及临床症状。结果:1.以灭活CB5全病毒免疫小鼠抗血清作为一抗,HRP标记羊抗小鼠IgG抗体为二抗,通过Western blot对sf9昆虫细胞的蛋白表达进行验证,在36 k Da和28 k Da处均出现目的带,分别为VP1和VP3;透射电子显微镜下可观察到纯化的CB5 VLPs颗粒的形态与灭活CB5病毒颗粒的相似,其直径约为30 nm。2.ELISA结果显示,CB5 VLPs疫苗和CB5灭活疫苗免疫小鼠血清中均可检测到特异性IgG抗体,且其变化趋势相同:在第二次加强免疫后第2周,IgG抗体水平明显升高且达到高峰,之后抗体尽管有轻微下降,但仍持续较高水平。CB5 VLPs疫苗和CB5灭活疫苗免疫小鼠血清中IgG抗体水平明显增高(p<0.05)。微量中和实验结果显示,CB5 VLPs疫苗组小鼠血清针对CB5的平均中和抗体效价为1∶160,CB5灭活疫苗组小鼠血清针对CB5的平均中和抗体效价为1∶128,相对于阴性对照组和PBS组,CB5VLPs疫苗和CB5灭活疫苗免疫小鼠血清的中和作用明显增强(p<0.05)。3.小鼠攻毒保护实验结果显示,CB5 VLPs免疫的母鼠所生小鼠被完全保护,CB5灭活病毒免疫的母鼠所生小鼠被部分保护,其最终生存率分别为100%和80%。结论:本研究使用昆虫杆状病毒系统成功构建表达CB5 VLPs作为候选疫苗,该候选疫苗可诱导小鼠产生特异性IgG抗体,且能在体外赋予RD细胞针对CB5病毒的保护作用,在体内赋予新生小鼠针对CB5病毒的有效保护力,为研发CB5疫苗奠定理论基础和应用基础。
其他文献
伴随着我国高铁道岔行业的日益成熟以及行业竞争者的逐渐增多,企业既要想方设法提高产品质量,又要降低企业运营资本,以保持市场竞争力。加强企业库存管理,降低库存成本,是给企业降本增效的重要途径之一。本篇论文以新铁公司为研究对象,通过对新铁公司库存管理现状的介绍,深入分析新铁公司当前库存管理面临的问题以及产生问题的原因,然后系统性的提出了三种库存管理改进方案。首先对新铁公司库存基础资料混乱以数据不准确的问
危险化学品企业的生产安全,在各个国家安全生产工作中都占据着重要地位,而随着近年来港口企业的发展,企业规模随之不断扩大,对于港口危险化学品企业的安全管理,特别是重大危险源的安全管理提出了更大的挑战。另一方面,由于港口危险化学品企业因为自身安全风险较大,其极易发生社会影响恶劣、损失巨大的安全生产事故。因此,对危险化学品企业的安全生产管理体系进行优化,做好各项安全工作是确保企业长治久安必须面对的课题。Y
顾客感知以服务接触能力为基础,是顾客与服务传递系统(service delivery system)间的互动。随着互联网的发展、新媒体技术的出现,服务传递方式已经发生很大的变化。本文研究的是顾客与景区之间以新媒体平台为服务传递系统“面对面”进行的互动。本文选取北戴河碧螺塔酒吧海上公园作为研究对象。首先,分析其新媒体营销内外部环境,阅读大量文献,以消费行为、消费者购买决策、SOR和AISAS理论为指
黄河是中华民族的母亲河,黄河流域是华夏文明的重要发祥地。山西黄河流域的自然遗产和文化遗产具有较高的历史文化内涵和时代价值,代表着中华民族独特的精神标识。同时,黄河流域生态保护和高质量发展也彰显了“中国之治”,未来所取得的重大成就必然可以作为新的旅游吸引物,激发游客对国家的情感依恋,提升游客的国家认同感。因此,山西黄河流域旅游高质量发展建构国家认同功能的实现路径可以从四个方面进行:规划先行,锚定国家
目的提高肾内科临床药师培训临床实践技能的学习质量。方法带教药师建立PBL(problem-based learning)结合CBL(case-based learning)的教学查房模式。查房流程包括确定患者、预习病例、汇报病史、药学问诊、问题讨论、自由讨论、总结点评以及完善记录。结果教学查房通过分析实际案例和讨论问题,有助于培养学员病例汇报、药学问诊、用药教育、医嘱重整等技能,引导学员评估患者依
设备作为现代化生产型企业赖以生存和发展的物质基础之一,它的稳定性及可靠性直接作用于企业的生产经营活动,并影响着企业的经济效益。因此设备管理已经成为企业管理的重要组成部分,设备维修管理作为设备管理的核心内容也正在被越来越多的生产企业作为企业发展的重要课题进行研究。本文以秦皇岛港ZH公司的设备维修管理为研究对象,首先,通过对秦皇岛港ZH公司港口机械设备的维修、使用现状进行深入研究分析,总结了秦皇岛港Z
受益于互联网的迅速发展和旅游业的日渐繁荣,线上售票方式在景区门票销售途径中的比重逐渐提高,线上售票系统的优势也得以发挥。通过长时间的积累,系统中庞大的数据量可以用于分析游客行为,依据这些行为制定相应的营销策略可以帮助景区拓展游客数量,促进游客消费。如何有效利用冗杂的系统数据分析游客习惯成了亟待解决的难题。针对这些问题,对面向票务的用户的画像的研究与应用成为了当下所需。首先,描述了国内在线旅游和景区
随数据采集工具的轻量化、采集方法的便捷化,处理的底层代码逻辑与承载机体的更新换代,实时可用的时间序列数据预测技术在金融、交通、医疗等领域愈发重要。由于近年疫情反复的影响,实体经济体系较往年出现了更明显的波动,原始数据的时间序列使用传统线性、平稳的方法进行预测时会出现较大误差。同时在进行多年数据的统计分析时,需要考虑数据(不论是年度、季度还是月度)会受到模糊发展趋势的季节因素的影响。充分利用疫情下具
本文将运用动力系统的分支理论对(2+1)维广义修正的色散水波方程和(1+1)维共振非线性薛定谔方程进行研究,主要研究内容如下第一章,对非线性偏微分方程的研究背景,研究现状和进展,一些相关的预备知识以及论文的主要内容进行了介绍.第二章,利用动力系统的分支理论研究了(2+1)维广义修正的色散水波方程,通过对方程所对应平面系统的相图和分支情况进行讨论,从而获得在一些参数条件下的精确行波解,并给出了具有代