论文部分内容阅读
Sp1属于特异性蛋白质Sp/Kruppel转录因子家族,与富含GC的顺式元件结合发挥作用,从而调节相关基因的转录、细胞周期及细胞凋亡。在多种癌症中Sp1是过表达的,且Sp1的水平与患者的生存是相关的。因此,很多研究表明在治疗癌症中,Sp1可以作为药物筛选的靶向分子。根皮素属于二氢黄酮类化合物,主要分布于苹果、梨等多汁水果中。根皮素具有多种生物活性,如抗氧化、抗炎症、抗肿瘤和保护血管等。大量研究结果表明,根皮素可以抑制多种癌症细胞的存活、增殖并诱导细胞凋亡。但根皮素抑制前列腺癌细胞的生长和诱导前列腺癌细胞凋亡的具体分子机制研究甚少。因此,我们设计实验探究了根皮素诱导前列腺癌细胞凋亡的分子机制:首先,MTT、CCK-8实验结果表明:不同浓度的根皮素(0,20,50和100μM)对前列腺正常细胞WPMY-1几乎没有影响,但可以显著抑制前列腺癌LNCaP、CWR22Rv1、PC-3和DU145细胞的存活;通过western blot实验结果,我们发现根皮素以浓度依赖性的方式诱导前列腺癌细胞发生凋亡,且c-Caspase 3、c-Caspase 8、c-Caspase 9和c-PARP-1蛋白水平明显上调;另外,流式细胞术(FCM)结果表明根皮素诱导前列腺癌细胞周期阻滞在G2/M。其次,根据western blot实验结果,我们还发现:根皮素抑制PI3K-AKT和MEK-ERK1/2信号通路,进而下调Sp1和Sp3/4的mRNA和蛋白水平及其下游基因的表达,此外我们还发现Sp1和Sp3/4蛋白水平降低与泛素蛋白酶体降解方式无关,而是通过下调nucleolin蛋白的磷酸化水平进而减少了对Sp1 mRNA 5’UTR的作用从而使Sp1蛋白的翻译水平下调。最后,裸鼠体内实验的结果表明,高、低浓度的根皮素均可以抑制体内前列腺癌细胞异种移植肿瘤的生长,且对裸鼠体重几乎没有影响;western blot检测发现,根皮素处理下调了肿瘤组织中Sp1,Sp3/4,Survivin和Ki-67的蛋白水平,上调了 c-Caspase 3和c-PARP-1蛋白水平。说明根皮素可以在体内抑制异种移植瘤的生长并诱导瘤组织细胞发生凋亡。综上所述,根皮素通过转录水平及翻译水平双重下调Sp1的蛋白水平,进而抑制前列腺癌细胞的存活,促进前列腺癌细胞周期阻滞并诱导细胞凋亡。