研究背景:鼻咽癌最多见于东亚以及东南亚,尤其在中国南方地区,其起病部位隐匿,往往发现已到中晚期。目前治疗手段主要以放射治疗为主,但其临床副作用明显,患者往往疗效不佳且易复发。研究表明姜黄素对鼻咽癌具有显著抗肿瘤作用,包括抑制鼻咽癌细胞增殖、促进鼻咽癌细胞凋亡以及增强鼻咽癌细胞放射敏感性等。姜黄素亦通过钙离子相关基因影响肿瘤细胞功能,CAMK1作为Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶（CAMK）家族成员之一,是重要的调节者,具有广泛的生物和病理功能。中医药因其多成分、多通路、多靶点的特点在抗肿瘤方面应用广泛,且在临床上疗效显著,但其具体的抗肿瘤作用机制仍需进一步明确。随着生物信息学、多药理组学的发展,基于网络药理学的研究方法被证明是研究中医中药的重要手段。研究目的:1.通过姜黄素作用鼻咽癌CNE-2细胞初步体外验证姜黄素对鼻咽癌细胞的生长抑制作用,进一步通过建立人鼻咽癌斑马鱼模型,在体内验证姜黄素的抗鼻咽癌作用。2.通过检测姜黄素干预后鼻咽癌细胞内CAMK1表达变化以及钙离子浓度的变化探讨姜黄素调控CAMK1表达变化的抗鼻咽癌的机制。3.通过基于网络药理学的综合分析方法来评价中医药抗肿瘤作用机制。方法:1.利用MTT实验说明姜黄素对CNE-2细胞的生长抑制作用;利用斑马鱼胚胎,借助显微注射方法将人鼻咽癌CNE-2细胞注射至斑马鱼胚胎,建立人鼻咽癌斑马鱼异种移植模型,利用斑马鱼鼻咽癌模型,检测姜黄素在体内对鼻咽癌的抗肿瘤作用。2.借助qPCR实验说明姜黄素对鼻咽癌细胞内CAMK1表达量的影响;借助Fluo-3AM荧光染色实验说明姜黄素对鼻咽癌CNE-2细胞内钙离子浓度的影响。3.基于网络药理学的综合分析方法、联合GSE数据库中结直肠癌的芯片数据、TCGA数据库来研究中药组合黄连与乌梅是如何对结直肠癌发挥治疗的作用机制。结果:1.MTT实验表明10μmol/L和20μmol/L姜黄素干预鼻咽癌CNE-2细胞48h后,对其具有明显抑制作用（P＜0.05）。染色后的鼻咽癌CNE-2细胞成功移植到斑马鱼胚胎中;在荧光显微镜下能够清晰观察到斑马鱼卵黄囊中的人鼻咽癌CNE-2细胞;移植后斑马鱼可以持续存活5d以上,鼻咽癌细胞在斑马鱼体内可继续生长和扩散;姜黄素干预斑马鱼鼻咽癌模型结果显示姜黄素在体内对鼻咽癌有抗肿瘤作用,与体外实验相符。2.qPCR实验结果显示姜黄素明显下调CAMK1;Fluo-3AM荧光染色实验显示姜黄素干预后鼻咽癌细胞内钙离子荧光强度增加。3.网络药理学分析显示Kaempferol、Oleanolic Acid、Quercetin、Ursolic Aicd是黄连与乌梅作用于结直肠癌的最重要的关键活性成分,黄连ND1、ICAM1、IL1B、IL6、MMP1、MMP3、MMP9、MYC、SRTPINE1、VEGFA 是黄连乌梅药对作用结直肠癌的潜在基因。结论:1.姜黄素在体外可以抑制鼻咽癌细胞生长,在人鼻咽癌斑马鱼模型中,姜黄素对鼻咽癌具有抗肿瘤作用。2.姜黄素干预后钙离子通路相关基因CAMK1表达抑制,其调控机制并非通过调节细胞内钙离子浓度影响CAMK1的激活,而是通过其他可能调控网络调节。3.中药组合黄连乌梅可以通过网络药理学预测的分子机制对结直肠癌进行干预,从而证实网络药理学方法可以成为研究中医药机制的有效工具。