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长链非编码RNA(long-noncoding RNA,lncRNA)是长度大于200个核苷酸序列,可以调控肿瘤细胞的转移、侵袭、增殖、细胞周期及凋亡等生物学行为,在不同肿瘤组织中的表达水平有显著差异,并具有细胞特异性,这些LncRNA有望成为新的肿瘤标志物或治疗靶点。Mi-Lnc70是小鼠胰腺特异表达的一个LncRNA,与小鼠成纤维细胞相比,在小鼠胰腺癌细胞中Mi-Lnc70特异性高表达。本研究根据小鼠Mi-Lnc70 DNA序列,选取不同靶点设计构建了三条LNA GapmeRs,对体外培养小鼠胰腺癌细胞系Min6进行Mi-Lnc70敲减,发现GapmeRs1#敲减效率最高。通过对不同的转染时间、细胞密度和GapmeRs浓度的组合进行筛选,最终确定的转染时间72h、细胞密度9×10~5或1.5×10~6个/孔和75nM浓度GapmeRs为最适转染条件,72h后检测的敲减效率可达到50%~80%。通过对转染后24h、48h和72h的细胞与空白对照和阴性对照细胞进行活力检测,发现敲减Mi-Lnc70后细胞的活力下降。利用Transwell和细胞划痕等实验,发现转染细胞的迁移、侵袭和愈合能力均有所减弱,迁移能力下降了44%,侵袭能力下降了67.5%。同时细胞周期在G2/M期阻滞,细胞的凋亡比例增多。表明Mi-Lnc70表达降低可以有效抑制小鼠胰腺癌细胞的恶性表型。同时,我们还检测了Mi-Lnc70的敲减对Min6胰岛细胞特征的影响。Real-Time PCR结果显示,随着Mi-Lnc70表达量的敲减,Min6细胞中胰岛素相关转录因子Insulin1、Insulin2、Somatostatin、Pax4、MafB、Isl-1、NeurD1、Pax6、Pdx1、Nkx6.1和Glucagon,以及参与胰腺器官发生的基因表达级联反应的MiRNA(miR-124、miR--15a-3p、miR--15b、miR--23b-3p、miR--30d-5p、miR--16-1-5p、miR--195-5p、miR--7和miR--375)都有所下调;与Mi-Lnc70呈负相关的几种小鼠胰岛特异性LncRNA,包括Mi-Lnc77、Mi-Lnc78、Mi-Lnc85、Mi-Lnc87表达水平升高;与Mi-Lnc70呈正相关的几种小鼠胰岛特异性LncRNA,包括Mi-Lnc71、Mi-Lnc72、Mi-Lnc75、Mi-Lnc76、Mi-Lnc80表达水平显著降低。免疫荧光染色分析发现,Mi-Lnc70敲减使C肽、胰岛素、胰高血糖素和生长激素抑制素的免疫荧光减弱,关键的β细胞特异性转录调节因子PDX1免疫荧光也减弱。Western blot结果同样证实,PDX1、胰岛素、胰高血糖素的蛋白表达量在Mi-Lnc70敲减细胞系中下调。利用Elisa检测,发现在Mi-Lnc70敲减细胞上清液中的胰岛素和胰高血糖素的分泌,胰岛素的分泌水平没有明显变化,胰高血糖素的分泌水平增多。综上所述,Mi-Lnc70的敲减,不但使Min6细胞的迁移、侵袭和愈合能力有所减弱,而且降低胰岛素相关转录因子和胰腺器官发生的基因表达,在胰岛发育和细胞癌变中起着重要作用,其作用机制的研究可能为深入了解胰腺癌的发病机制提供参考。