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目的:1.了解COVID-19康复者和SARS-CoV-2未感染者接种疫苗后产生的RBD特异性和SARS-CoV-2特异性T细胞免疫应答;2.揭示未感染者接种疫苗后的抗原特异性T细胞变化规律;3.研究疫苗诱导的抗原特异性T细胞的记忆表型和功能;4.综合分析疫苗诱导的不同特异性免疫应答之间的相关性。方法:1.本研究从湖北武汉招募49名COVID-19康复者和从四川成都招募33名SARS-CoV-2未感染者,其中康复者在接种疫苗前（T0）、接种1剂疫苗后1个月（T1）和接种2剂疫苗后1个月（T2）,未感染者在T0、T2、接种2剂疫苗后3个月（T3）、6个月（T4）,以及接种3剂疫苗后2周（T5）采集外周血,并分离血浆和PBMC。2.通过ELISA检测RBD特异性抗体,通过胞内染色和流式细胞术检测抗原特异性CD4+和CD8+记忆T细胞。3.通过流式细胞术检测CD45RA和CCR7的表达,对抗原特异性记忆T细胞进行记忆分型,通过CBA检测未感染者中的细胞因子分泌水平。4.通过第二代测序检测所有康复者和未感染者的HLA等位基因,了解其携带不同HLA等位基因个体的T细胞免疫应答情况。5.利用Pearson检验,对疫苗诱导的抗原特异性T细胞频率和抗体水平进行相关性分析。结果:1.T0时,所有康复者均为RBD特异性抗体阳性,所有未感染者为RBD特异性抗体阴性。T1时,康复者RBD特异性抗体水平显著上升（P=0.0028）。T2时,康复者RBD特异性抗体保持稳定,未感染者中,97%（32/33）为RBD特异性抗体阳性,抗体水平显著增强（P＜0.0001）。2.在康复者中,T0时,71%（12/17）可检测到抗原特异性CD4+记忆T细胞;T1时,74%（14/19）可检测到抗原特异性CD4+记忆T细胞;T2时,94%（17/18）可检测到抗原特异性CD4+记忆T细胞。与T0相比,T2时的抗原特异性CD4+记忆T细胞频率显著升高（P=0.0006）。在未感染者中,T0时,27%（4/15）未感染者可检测到低水平抗原特异性CD4+记忆T细胞,T2、T3、T4和T5时,分别有79%（26/33）、81%（21/26）、78%（21/27）和 80%（16/20）可检测到抗原特异性 CD4+记忆T细胞,抗原特异性CD4+记忆T细胞频率显著升高（P=0.003,0.0009,0.0001,0.0001）。3.在康复者中,与T0相比,T1和T2时检测到的抗原特异性CD8+记忆T细胞频率有所上升,但差异不具有统计学意义（P=0.6583,0.1935）;在未感染者中,与T0相比,T2、T3、T4和T5时检测到的抗原特异性CD8+记忆T细胞频率有所上升,但差异不具有统计学意义（P=0.5416,0.3950,0.3996,0.4233）。4.在康复者的抗原特异性CD4+记忆T细胞中,与T0时相比,T1时,效应记忆型（TEM）和终末效应记忆型（TEMRA）T细胞比例明显上升（P=0.0482,0.0126）;T2时,TCM、TEM和 TEMRA频率均显著上升（P=0.0003,0.0028,0.0008）。T0、T1 和T2时检测到的抗原特异性CD4+记忆T细胞主要为TCM,TEM次之,TEMRA占比最低。在未感染者的抗原特异性CD4+记忆T细胞中,与T0相比,T2、T4和T5时,TCM、TEM和TEMRA频率显著上升（P＜0.05）;T3时,TCM和TEMRA频率显著上升（P＜0.05）。所有时间点检测到的抗原特异性CD4+记忆T细胞主要为TCM,TEM次之,TEMRA占比最低。5.在未感染者中,与T0相比,T2时检测到的IFNγ和IL2显著上升（P＜0.05）,T3、T4和T5时检测到的IFNγ、TNFα和IL2水平显著上升（P＜0.05）。6.在CD8应答较弱和较强组中,HLA-A*02:06、C*03:04和C*08:01的频率分别为:0.042/0.143,0.021/0.190,0.146/0.024;在 CD4 应答较弱和较强组中,HLA-DRB1*08:03、DQA1*01:03、DQA1*02:01、DQB1*03:03、DQB1*06:01、DPA1*01:03、DPA1*02:02、DPB1*02:02 和 DPB1*04:01 的频率分别为:0.125/0.024、0.146/0.048、0.042/0.167、0.125/0.262、0.188/0.024、0.208/0.429、0.542/0.429、0.125/0.048、0.000/0.167。7.在康复者中,T2时的抗原特异性CD4+记忆T细胞频率与CD8+记忆T细胞频率具有显著相关性（P＜0.0001,r=0.9476）,在未感染者中,T2和T4时的抗原特异性CD4+记忆T细胞频率与CD8+记忆T细胞频率具有显著相关性（P=0.0017,r=0.5568;P=0.0015,r=0.5818）。结论:1.COVID-19康复者和SARS-CoV-2未感染者接种2剂疫苗后,有效诱导了 RBD特异性抗体和SARS-CoV-2特异性CD4+T细胞免疫应答。2.未感染者接种2剂疫苗后1-6个月,抗原特异性CD4+记忆T细胞频率保持上升趋势,接种3剂疫苗后2周,抗原特异性CD4+记忆T细胞频率保持稳定。3.接种2剂疫苗后,康复者和未感染者产生了以TCM为主的抗原特异性CD4+记忆T细胞,CBA结果提示未感染者可能产生了以Th1为主的抗原特异性CD4+T细胞。4.康复者和未感染者接种疫苗后产生的抗原特异性CD4+记忆T细胞具有促进CD8+T细胞应答的潜力。