禽大肠杆菌病是危害养禽业发展的重要细菌性疾病之一,禽大肠杆菌是主要病原。目前该病主要防控手段较零散,在潜伏或发病初期缺乏一定的介入机制,造成该病进一步流行。为了解重庆地区禽大肠杆菌流行情况,构建一套禽大肠杆菌病快速介入机制及高效防控体系,本研究采集2016年～2018年重庆长寿、万州等18个地区疑似禽大肠杆菌病的养殖场、点的禽病料、粪便、环境拭子、其他动物、飞虫,以及周边的养殖场、农贸市场等场所等共计1866份样品,通过细菌分离、镜检、PCR等研究,分别从不同来源、养殖模式、地区、月份、家禽日龄、家禽品种等六个维度进行分析,同时进行细菌毒力基因检测与耐药性分析,后结合重庆地区特点,根据德尔菲法—层次分析法、模糊综合评价法、综合指数评价法等调查研究方法,综合调查研讨,构建禽大肠杆菌病风险评估模型并开展应用,旨在为重庆地区禽大肠杆菌防控提供基础数据,为防控动物疫病提出新思路。1.重庆地区禽大肠杆菌分离鉴定与系统进化分析。对样品进行细菌分离鉴定,结果显示共分离到880株E.coli,其中禽源、飞虫样品分离率均高于50%,在同采样场点的其他动物中,鼠分离率最高为59.46%。经16S r RNA测序分析并除重,最终得到792株E.coli,同源性分析显示,环境拭子中禽栏、水源与禽源E.coli同源性高;猪源与禽源E.coli同源性较其他动物高;蝇与禽源E.coli同源性较其他飞虫高,表明E.coli在不同环境、动物、飞虫中互相传播较严重,尤其需要关注水源、在场其它动物和蝇。E.coli系统进化分子分群情况结果显示,A群占43.18%,B1群占20.55%,B2群占23.73%,D群占12.37%,表明重庆地区以A群和B1群E.coli为主,其次是致病性强的B2群、D群。2.不同维度的E.coli分离情况分析。结果显示,农村散养点E.coli检出率高于散养场和规模场,渝东南高于渝东北高于渝西;2月、8月显著高于其他月份,呈现冬季高于秋季高于夏季高于春季;鸡源高于鸭和鹅,外来品种高于本地品种,0周～5周龄禽高于其他周龄禽,呈现出周龄越小越易感染的特点,B2群和D群E.coli流行特点与整个群体流行特点相近,表明E.coli在流行当中具有一定的地方特点,与环境、季节、品种等有较大相关。3.分离株毒力基因检测分析。结果显示,286株B2群和D群E.coli中,iss、iuc D、irp2和hly F等4个毒力基因的分布率最高,含有5种以上毒力基因的强毒株共有72株;hly F、tsh、aat A基因多分布在渝西,irp2、pap C、cvi/cva基因多分布在渝东北和渝东南,iss、iuc D基因分布呈广泛性,此外,通过与重庆水域图对比发现,hly F、tsh、iuc D、iss基因在水源多的地区检出率高,呈现出沿长江流域分布的特点;hly F、irp2、iss、iuc D基因多在冬季和夏季检出,pap C基因存在区域性和季节性流行特征;iss、iuc D基因广泛存在于各日龄家禽E.coli中,hly F基因的分布和日龄呈反比;外来品种hly F、cvi/cva、tsh、ast A基因检出率较高,cvi/cva基因在地方品种中未检出。4.分离株耐药性分析。重庆地区E.coli多重耐药比为98.61%,B2群E.coli多重耐药现象最严重,耐药表型与其致病性显著相关。E.coli多重耐药比逐年递增,禽源高于人源,外来品种高于本地品种;散养场多重耐药较严重,多数地区耐药以12重～15重居多,多重耐药比呈现渝西高于渝东南高于渝东北;β-内酰胺类药物耐药基因检出率高,尤其是CTX-M基因极显著高于其他耐药基因,耐药基因的检出分析与耐药性表型分析相类似。5.禽大肠杆菌病风险评估模型构建与应用。基于重庆地区禽大肠杆菌流行特点,构建包括区位特征、养殖情况、兽医基础、疫病状况、用药情况等5个指数层、38个指标层的禽大肠杆菌病风险评估模型,同时对风险等级进行评定,确定高、中、低三个风险等级,并制定不同风险等级应采取的具体防控措施。对重庆市万州区某发病鸡场通过模型快速介入,在综合防控一周后,该场疫情有所缓解,发病率由9.42%降至4.33%,第二周治疗后未见新发病例,禽大肠杆菌病发病率同比显著下降,整个冬季保持相对稳定,表明该防控模型具有一定的效果。