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目的 研究叶酸(folicacid)、维生素B6(VitaminB6，VB6)及维生素B12(VitaminB12，VB12)对局灶性脑缺血大鼠的保护作用，并探讨其机制，为研究维生素防治脑血管疾病提供科学依据。
方法 1.高效液相色谱(highperformanceliquidchromatography，HPLC)测定血浆同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)方法的建立：血浆Hcy经硼氢化钠还原后与SBD-F进行衍生化反应。反应产物经C18反相色谱柱分离，等度洗脱，荧光检测器测定，以峰面积进行定量。2.叶酸、VB6、VB12对脑缺血大鼠抗氧化作用的研究：选用SD成年大鼠，分为四组，假手术组(SO)，灌胃生理盐水10ml/(kgbw·d)；缺血组(IM)，灌胃生理盐水10ml/(kgbw·d)；缺血+叶酸组(IM+FA)，灌胃叶酸4mg/(kgbw·d)；缺血+复合维生素组(IM+CV)，灌胃叶酸4mg/(kgbw·d)，VB612mg/(kgbw·d)，VB1224μg/(kgbw·d)。每组8只，雌雄各半。灌胃28d后制备大脑中动脉闭塞(middlecerebralarteryocclusion，MCAO)模型，造成局灶性脑缺血。分别于灌胃前后和缺血后测定大鼠血浆Hcy浓度及血清抗氧化指标。在缺血后测定大鼠的学习记忆能力及脑组织抗氧化指标，并进行脑部磁共振(megneticresonanceimaging，MRI)扫描和脑组织光镜病理观察。3.叶酸、VB6、VB12对脑缺血大鼠脑组织血红素加氧酶(hemeoxygenase，HO)-1和HO-2mRNA表达作用的研究：缺血后取鼠脑，采用逆转录-聚合酶链反应(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)技术，以β-actin为内参基因，测定脑组织HO-1、HO-2mRNA的相对表达量。
结果 1.HPLC测定血浆Hcy，Hcy浓度在0-50μmol/L范围内与绝对峰面积呈线性关系，回收率为96.40-104.30％，样内差异变异系数范围2.45-3.64％，日内差异变异系数范围2.56-3.91％，日间差异变异系数范围3.19-3.96％。2.①灌胃前，各组大鼠各项指标均无显著性差异(P＞0.05)。②灌胃后及缺血后，IM+FA组和IM+CV组血浆Hcy均低于灌胃前和SO、IM组(P＜0.05或P＜0.01)，且IM+CV组低于IM+FA组(P＜0.05)。③灌胃后缺血前，IM+FA组和IM+CV组血清超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase，GSH-Px)活性高于灌胃前和SO、IM组(P＜0.05或P＜0.01)；血清丙二醛(maleicdialdehyde，MDA)含量低于灌胃前水平和SO、IM组(P＜0.05或P＜0.01)；血清乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase，LDH)活性和一氧化氮(nitricoxide，NO)含量与灌胃前和SO、IM组相比均无显著性差异(P＞0.05)。④建立MCAO模型后，IM+FA组和IM+CV组血清和脑组织SOD、GSH-Px活性高于IM组，MDA、NO含量低于IM组(P＜0.01)，血清LDH活性低于IM组(P＜0.01)。⑤IM+FA组和IM+CV组神经功能缺失评分低于IM组(P＜0.01)，在Y型迷宫中受电击次数也低于IM组(P＜0.01)，而记忆正确次数IM+CV组高于IM组(P＜0.05)。⑥MRI扫描结果：缺血后6h，IM+FA组和IM+CV组ADC和DCavg值高于IM组(P＜0.05或P＜0.01)。⑦光镜观察结果：IM组脑皮质神经细胞体积缩小，染色加深，胞浆及胞核固缩，与IM组相比，IM+FA组神经细胞固缩减轻，IM+CV组脑组织病变改善明显，形态接近SO组。3.IM+FA组和IM+CV组大鼠脑组织HO-1mRNA相对表达量低于IM组(P＜0.05或P＜0.01)，HO-2mRNA表达量高于SO组(P＜0.05)，与IM组无显著性差异(P＞0.05)。
结论 1.HPLC法测定血浆Hcy，灵敏度高，稳定性及重复性好，可用于Hcy相关疾病的研究。2.叶酸、VB6和VB12能降低脑缺血大鼠血浆Hcy浓度，且联合补充效果优于单独补充叶酸。3.叶酸能增加脑缺血大鼠SOD和GSH-Px活性，减少MDA、NO含量和LDH活性，从而提高脑缺血大鼠的抗氧化能力。联合补充VB6和VB12未见更佳效果。4.叶酸能增强脑缺血大鼠学习记忆能力，改善神经功能和缺血后脑组织形态，且与其联合补充VB6和VB12表现出优于单独补充叶酸的保护作用。5.叶酸、VB6和VB12能抑制脑缺血大鼠HO-1mRNA的表达，对HO-2mRNA表达没有影响。因此，叶酸、VB6和VB12通过降低血浆Hcy含量，提高机体抗氧化能力，改善脑功能，抑制HO-1mRNA表达，对局灶性脑缺血损伤产生一定的防治作用。