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目的:1通过观察健脾补肾解毒方干预MDS外周血象、T细胞亚群比例的变化,探讨健脾补肾解毒方治疗MDS的临床疗效及调整免疫的作用机制。2通过观察健脾补肾解毒方作用后MDS-MSC生物学特性及MSC对HSC、T细胞亚群功能影响的变化,探讨MDS的免疫发病机制,阐明健脾补肾解毒方调节MDS-MSC免疫异常的作用机制。方法:1 健脾补肾解毒方的疗效观察研究设MDS对照组、MDS治疗组和正常对照组。对照组20例,采用西医常规方法治疗;治疗组40例,在对照组治疗基础上加用健脾补肾解毒方随证加减治疗,包括正虚毒蕴型（较低危组）23例和毒盛正虚型（较高危组）17例;正常对照组10例。观察指标包括治疗前后外周血象和T细胞亚群Th（CD3+CD4+）和Ts（CD3+CD8+）比例,所有MDS患者在入组时及治疗2个疗程结束后（3个月为一疗程）均抽取患者外周血两管各3ml,分别应用全自动血细胞分析仪检测外周血象、应用流式细胞仪检测Th和Ts 比例,并计算Th/Ts。正常对照组只在入组时检测外周血象和T细胞亚群（Th、Ts）比例作为正常参照。2 健脾补肾解毒方调节MDS-MSC免疫的作用研究设正常对照组、MDS对照组和MDS中药组（包括正虚毒蕴型和毒盛正虚型）,共培养实验另设空白对照组。（1）用肝素抗凝管无菌抽取MDS患者和营养性贫血患者骨髓液3mL,全骨髓贴壁法体外培养及传代扩增MSC,P2-P3代MSC表型鉴定,观察各组MSC形态异同,绘制MSC生长曲线。（2）MSC与HSC共培养:用肝素抗凝管无菌抽取营养性贫血患者骨髓液3mL,磁珠分选CD34+CD38-,细胞计数法和CCK-8法检测各组MSC支持HSC增殖的能力。（3）MSC与T细胞亚群（Th、Ts）共培养:用EDTA抗凝管无菌抽取健康人外周血两管各5mL,磁珠分选 CD3+CD4+、CD3+CD8+两个细胞亚群,在 MSC:T（Th+Ts）设置为 1:20、1:40两个效靶比情况下,细胞计数法和CCK-8法检测各组MSC抑制T细胞增殖的能力,ELISA法检测各组MSC抑制共培养体系中细胞因子IFN-γ、IL-4分泌水平的能力。结果:1 健脾补肾解毒方的疗效观察研究1.1 一般背景资料:正常对照组、MDS对照组、MDS治疗组（包括正虚毒蕴型和毒盛正虚型）在性别、年龄和疾病危度分型上差异均无统计学意义（P＞0.05）。1.2外周血细胞计数变化（1）WBC:①治疗前对照组与治疗组WBC差异无统计学意义（P＞0.05）;②治疗后对照组与治疗组WBC均有上升,治疗组（包括正虚毒蕴型和毒盛正虚型）较对照组上升明显,但治疗前后比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。（2）Hb和PLT:①治疗前对照组与治疗组Hb和PLT差异无统计学意义（P＞0.05）;②治疗后对照组与治疗组Hb和PLT均有上升,治疗组（包括正虚毒蕴型和毒盛正虚型）较对照组上升明显,治疗组和治疗组正虚毒蕴型治疗前后比较差异有统计学意义（P＜0.05）,对照组和治疗组毒盛正虚型治疗前后比较差异无统计学意义（P＞0.05）。1.3 T细胞亚群比例变化（1）Th:①MDS组Th低于正常对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;②治疗前对照组与治疗组Th 比较差异无统计学意义（P＞0.05）;③治疗后对照组与治疗组Th均有上升,治疗组（包括正虚毒蕴型和毒盛正虚型）较对照组上升明显,治疗组和治疗组正虚毒蕴型治疗前后比较差异有统计学意义（P＜0.05）,对照组和治疗组毒盛正虚型治疗前后比较差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）Ts:①MDS组Ts高于正常对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;②治疗前对照组与治疗组Ts 比较差异无统计学意义（P＞0.05）;③治疗后对照组与治疗组Ts均有明显下降,治疗组（包括正虚毒蕴型和毒盛正虚型）较对照组下降明显,各组治疗前后比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。（3）Th/Ts:①MDS组Th/Ts低于正常对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;②治疗前对照组与治疗组Th/Ts 比较差异无统计学意义（P＞0.05）;③治疗后对照组与治疗组Th/Ts均有上升,治疗组（包括正虚毒蕴型和毒盛正虚型）较对照组上升明显,治疗组（包括正虚毒蕴型和毒盛正虚型）治疗前后比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,对照组治疗前后比较差异无统计学意义（P＞0.05）。2健脾补肾解毒方调节MDS-MSC免疫的作用研究2.1 MDS-MSC形态学观察:观察发现正常对照组MSC呈现纤细的纤维样外观,而MDS-MSC可呈现扁平及多角形外观、体积增大和生长速度缓慢等一系列衰老征象;健脾补肾解毒方作用后镜下观察发现MDS中药组MSC细胞衰老状态较MDS对照组有所缓解。2.2 MDS-MSC生长曲线测定:通过细胞计数法和CCK-8法绘制的生长曲线,结果显示:正常对照组MSC在数量和OD值上均较MDS-MSC高,MDS中药组MSC在数量和OD值上较MDS对照组稍高,中药组正虚毒蕴型MSC在数量和OD值上较MDS对照组和中药组毒盛正虚型高,MDS对照组在数量和OD值上较中药组毒盛正虚型高。2.3 MDS-MSC支持HSC增殖能力的检测:通过细胞计数法和CCK-8法测定共培养3d后MSC支持HSC增殖情况,结果显示:①空白对照组在数量和OD值上低于其他各组,差异有统计学意义（P＜0.05）;②正常对照组在数量和OD值上高于其他各组,除与中药组正虚毒蕴型比较无统计学意义（P＞0.05）,与其他各组比较均有统计学意义（P＜0.05）;③MDS中药组和中药组正虚毒蕴型高于MDS对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）,中药组毒盛正虚型低于MDS对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）。2.4 MSC对T细胞亚群和细胞因子水平的影响2.4.1 MDS-MSC抑制T细胞亚群（Th、Ts）增殖能力分析通过细胞计数法和CCK-8法测定共培养3d后MSC抑制T细胞增殖情况（1）1:20浓度情况下结果显示:在数量和OD值上,空白对照组高于其他各组,正常对照组低于其他各组,MDS中药组低于MDS对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）,中药组正虚毒蕴型低于MDS对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）,中药组毒盛正虚型高于MDS对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）1:40浓度情况下结果显示:①在数量上:空白对照组高于其他各组,正常对照组低于其他各组,MDS中药组低于MDS对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）,中药组正虚毒蕴型低于MDS对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）,中药组毒盛正虚型高于MDS对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）;②在OD值上:空白对照组高于其他各组,正常对照组低于其他各组,MDS中药组和中药组正虚毒蕴型低于MDS对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）,中药组毒盛正虚型高于MDS对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）。2.4.2共培养体系上清液中细胞因子IFN-γ、IL-4表达分析（1）1:20浓度情况下结果显示:①IFN-γ:空白对照组高于其他各组,正常对照组低于其他各组,MDS中药组低于MDS对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）,中药组正虚毒蕴型低于MDS对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）,中药组毒盛正虚型高于MDS对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）;②IL-4:空白对照组稍高于其他各组,正常对照组稍低于其他各组,MDS中药组和中药组正虚毒蕴型低于MDS对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）,中药组毒盛正虚型高于MDS对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）1:40浓度情况下结果显示:①IFN-γ:空白对照组高于其他各组,正常对照组低于其他各组,MDS中药组和中药组正虚毒蕴型低于MDS对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）,中药组毒盛正虚型高于MDS对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）;②IL-4:空白对照组稍高于其他各组,正常对照组稍低于其他各组,MDS中药组和中药组正虚毒蕴型低于MDS对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）,中药组毒盛正虚型高于MDS对照组,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:1.健脾补肾解毒方在有效提高MDS患者外周血象的同时,通过提高T淋巴细胞Th水平、降低Ts水平、纠正Th/Ts 比例倒置,调整MDS患者外周血T细胞亚群的免疫紊乱。2.MDS骨髓来源MSC形态学异常、生长增殖能力减低,抑制T淋巴细胞增殖和免疫逃逸能力减弱,减少IFN-γ、IL-4等细胞因子的分泌,降低HSC的增殖、分化水平,是MDS发病的重要机制。3.健脾补肾解毒方治疗MDS可以调控骨髓MSC功能,调整T细胞亚群的免疫紊乱,促进IFN-γ、IL-4等细胞因子的分泌,诱导HSC的增殖、分化,从而改善外周血象。