【摘 要】
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目的:乳腺癌是世界上第二大最常见的恶性肿瘤,每年有200多万女性罹患乳腺癌,成为造成女性恶性肿瘤死亡的首要因素。TMEM16A是一种钙激活氯离子通道,目前已有多项研究报道TMEM16A在乳腺癌中过表达,从而影响乳腺癌的增殖、迁移、侵袭并与预后不良相关。有报道,TMEM16A在内质网（ER）和质膜（PM）连接位点处表达,IP3R等离子通道在此处表达并参与调节Ca2+信号传导。值得注意的是,在ER-P
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目的:乳腺癌是世界上第二大最常见的恶性肿瘤,每年有200多万女性罹患乳腺癌,成为造成女性恶性肿瘤死亡的首要因素。TMEM16A是一种钙激活氯离子通道,目前已有多项研究报道TMEM16A在乳腺癌中过表达,从而影响乳腺癌的增殖、迁移、侵袭并与预后不良相关。有报道,TMEM16A在内质网（ER）和质膜（PM）连接位点处表达,IP3R等离子通道在此处表达并参与调节Ca2+信号传导。值得注意的是,在ER-PM结合蛋白缺乏的细胞中,PM的磷酸肌醇信号会发生错误地调节,从而会激活未折叠蛋白反应（UPR）。GRP78是内质网中一类重要的分子伴侣,具有结合Ca2+和抗凋亡的特性,可作为内质网应激的标记蛋白。与正常组织相比,GRP78在乳腺癌中的表达升高,且GRP78表达与肿瘤耐药、侵袭性增加和患者预后不良相关。本文的研究内容主要是探究TMEM16A对乳腺癌内质网应激相关通路的影响从而调节乳腺癌细胞增殖的作用。研究方法:在MCF-7和T47D乳腺癌细胞中,转染TMEM16A过表达和空载体质粒、TMEM16A sh RNA和Scrambled sh RNA质粒,利用Western blot技术检测转染后细胞中GRP78,PERK,P-PERK,ATF4,IRE1,P-IRE1和ATF6的蛋白表达水平。应用CCK-8实验检测转染了TMEM16A过表达载体和空载体质粒后MCF-7和T47D细胞的增殖情况,同时检测经PERK抑制剂（GSK2606414）处理后两株细胞的增殖情况。结果:1、在MCF-7和T47D乳腺癌细胞中,TMEM16A过表达组的GRP78蛋白表达量明显高于空载体组;TMEM16A sh RNA组GRP78的表达量与Scrambled sh RNA组相比明显降低。2、在MCF-7和T47D乳腺癌细胞中,与内质网应激相关蛋白的表达情况:在TMEM16A过表达组中p-PERK/PERK、p-IRE1/IRE1的比值和ATF4蛋白的表达量明显高于空载体组,ATF6蛋白的表达在TMEM16A过表达组和空载体组无明显差异;在TMEM16A sh RNA组中p-PERK/PERK,p-IRE1/IRE1的比值与ATF4蛋白的表达量明显低于Scrambled sh RNA组,ATF6蛋白的表达在TMEM16A sh RNA和Scrambled sh RNA两组间无明显差异。3、TMEM16A过表达可以促进MCF-7和T47D细胞的的增殖;TMEM16A过表达的MCF-7和T47D细胞经PERK抑制剂处理24h后,细胞的增殖能力减弱。结论:1、TMEM16A可以激活MCF-7和T47D乳腺癌细胞内质网应激反应。2、TMEM16A可以激活MCF-7和T47D乳腺癌细胞内质网应激反应的PERK和IRE1信号通路,TMEM16A未能激活ATF6信号通路。3、TMEM16A通过内质网应激的PERK信号通路促进MCF-7和T47D乳腺癌细胞增殖。
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