紫苏叶为唇形科植物紫苏Perillafrutescens（L.）Britt.的干燥叶（或带嫩枝）,是我国传统的药食两用中药,具有解表散寒,行气和胃的功效和较高的食养价值。目前《中国药典》中对于紫苏叶药材设定的标准较薄弱,仅对来源、性状、鉴别、水分和挥发油含量进行了限度的设定,其中最亟待解决的就是化学成分含量标准的空缺,这主要是由于市售紫苏叶品种和食用品种等混乱,样本间差异较大等客观因素导致的。因此,为了从源头上控制紫苏叶药材的质量,本研究以市场上收集的不同基原的紫苏叶为研究对象,分析不同基原样品之间的各项含量差异,以期建立全面、准确的紫苏叶质量标准。研究目的以不同基原的紫苏叶为研究对象,从紫苏叶的水分及挥发油含量标准的考察、灰分和浸出物标准的增设、HPLC多成分含量测定方法的建立及挥发油GC指纹图谱的建立方面,较全面地对现有标准进行研究,为更有效地控制紫苏叶的质量提供数据支撑。同时,本文还对紫苏叶的颜色、气味与成分含量之间的相关性进行初步探讨,为进一步研究紫苏叶感官信息与内在成分的关联提供思路。研究方法1.药材的收集和基原鉴定:共收集42批市售紫苏叶,并根据《中国植物志》中记载的各变种特征,对收集到的所有紫苏叶样品进行基原鉴定。2.HPLC多成分含量测定方法的建立:通过系统的液质和气质分析,对含量测定的指标进行筛选及测定,探寻紫苏叶质量属性的规律性,确定适宜的含量测定指标,并建立其HPLC含量测定方法。3.挥发油GC指纹图谱的建立:建立紫苏叶挥发油的GC指纹图谱,对挥发油的整体信息进行概括,从定性方面对紫苏叶的质量进行整体控制。分别建立不同基原样品的挥发油GC指纹图谱,比较不同基原样品之间的挥发油组成差异。4.现有标准水分、挥发油含量的确认:对不同基原的样品中水分、挥发油进行测定,分析不同基原样品中的挥发油含量差异,对现有标准进行限度考察。5.灰分、浸出物含量标准的增设:对不同基原的样品中灰分、浸出物进行测定,分析不同基原样品中的浸出物含量差异,基于数据分析结果,考虑增设紫苏叶灰分、浸出物含量标准。6.颜色-气味与成分含量之间的关联分析:通过观察对所有药材的颜色进行采集,通过电子鼻检测对样品的气味信息进行提取,并进一步分析颜色、气味与含量之间的关联,以探讨紫苏叶“色紫、气香者为佳”这一传统感官评价方法的理论依据。研究结果1.药材的收集和基原鉴定:经基原鉴定,发现市场的样品上均为紫苏及其变种,且存在变种混用的情况。具体鉴定结果为:42批样品,其中17批为紫苏原变种,5批为野苏变种,10批为回回苏变种,3批为紫苏与野苏的混合样品,1批为紫苏与回回苏混合样品,3批为野苏与回回苏混合样品,另有3批样品无法确认。2.紫苏叶HPLC多成分含量测定方法的建立:选取紫苏醛、紫苏酮、咖啡酸、野黄芩苷、迷迭香酸作为代表性药效成分,建立多成分HPLC检测方法,测定不同基原样品的含量,并对结果进行综合分析。采用Kromasil C18（4.6×250mm,5μm）色谱柱,紫苏酮、紫苏醛,以甲醇-水溶液55:45为流动相,流速1 mL·min-1,柱温30℃,检测波长220 nm。咖啡酸、野黄芩苷、迷迭香酸的色谱条件:甲醇（A）-0.2%磷酸水溶液（B）梯度洗脱（0～20 min,25%～30%A;20～60 min,30%～43%A）,流速1 mL·min-1,柱温30℃,检测波长320 nm。结果显示,所建立的方法能够使样品中的各指标成分达到良好分离,在考察的范围内线性关系良好（r≥0.9999）,平均回收率93.67～104.90%,加样回收率的RSD均小于5%。结果表明,这5种成分在样品中普遍存在,且含量:迷迭香酸（4.83mg·g-1）>野黄芩苷（3.51mg·g-1）>紫苏酮（0.82mg·g-1）>紫苏醛（0.71mg·g-1）>咖啡酸（0.29mg·g-1）。当综合考虑样品中5种成分的含量时,不同基原间无明显差异。进一步通过相关性分析简化测定指标,发现当仅以样品中紫苏酮、紫苏醛、迷迭香酸的含量作为变量时,样品的聚类情况与以5种成分含量作为变量时相似,说明紫苏酮、紫苏醛、迷迭香酸是作为区分不同样品的重要评价指标。3.紫苏叶挥发油GC指纹图谱的建立:共测定了 35批样品挥发油的指纹图谱,发现各样品共有8个共有峰,通过标准品比对,确定了其中的紫苏烯、紫苏酮、紫苏醛色谱峰。具体方法为:采用OPTIMA-5 MS弹性石英毛细管柱（340℃,0.25 μm×0.32 mm×30 m）,初始温度为80℃,保持2 min,以0.5℃·min-1升至125℃,保持5 min,以20℃·min-1升至280℃,保持6 min;流量1.0 mL·min-1,分流比15:1,进样量为1μL。结果显示,所建立的紫苏叶挥发油的GC指纹图谱测定条件精密度好,稳定性高,重复性好。建立了所有样品挥发油GC指纹图谱的对照图谱,发现紫苏和野苏的指纹图谱与对照图谱的相似度较高（>0.8）,回回苏的较低（<0.7）,提示回回苏与紫苏、野苏的挥发油指纹图谱之间有差异。因此,分别建立了不同基原的样品指纹图谱,经对比分析,发现紫苏和野苏的指纹图谱整体较相似,表明二者的挥发油构成较相似;紫苏和回回苏的指纹图谱差异较大,主要区别在于紫苏、野苏样品的3号峰（紫苏酮）、5号峰明显高于回回苏,所建立的指纹图谱可以将紫苏、野苏和回回苏区分开来。4.紫苏叶现有质量标准中的水分、挥发油含量的考察:结果显示不同基原的样品水分含量差异不明显,现有水分标准比较符合市场药材的平均水平,建议继续沿用现行药典水分标准。对所有紫苏样品的挥发油含量进行了分析,建议继续沿用现有挥发油含量标准。但从基原角度分析,回回苏的挥发油含量整体较高,紫苏的挥发油含量较低,且范围较大。5.紫苏叶灰分、浸出物含量标准的增设:完成了30批样品的灰分检测,结果显示紫苏的总灰分、酸不溶性灰分范围较大,基于所有样品的灰分含量整体情况,建议设定总灰分不得高于16%,酸不溶性灰分含量不得高于7%的标准。整体来说,野苏浸出物含量最高,其次是回回苏,紫苏的浸出物含量相对较低（以冷浸法测得的水溶性浸出物为例,野苏的含量在16.28～29.62%,均值为21.05%;回回苏的含量在17.11～25.65%,均值为19.86%;紫苏的含量在12.00～23.18%,均值为17.78%）。对所有样品进行分析后,建议采用以冷浸法计,水溶性浸出物含量不得低于13%的标准。6.紫苏叶颜色、气味与成分含量之间的关联分析:研究发现紫苏叶药材的颜色不稳定,容易在加工、储存过程中发生变化。电子鼻所检测出的气味信息与基原、含量测定的结果也无法较好地拟合,无法为紫苏叶“辩状论质”的理论基础提供有效的数据支撑。研究结论1.紫苏酮、紫苏醛、迷迭香酸是紫苏叶的关键质量评价指标,本研究建立了紫苏叶中以上3种成分的HPLC含量测定方法,并建议设定限度为:紫苏酮、紫苏醛含量均不得低于0.04%,迷迭香酸含量不得低于0.1%。2.本研究建立了紫苏叶挥发油GC指纹图谱的测定方法,该图谱较能反映各变种的挥发油特征,其中紫苏和野苏变种的指纹图谱较相似,二者与回回苏变种的指纹图谱之间有明显差异。3.基于所有样品的水分、挥发油测定结果,建议继续沿用现行药典标准种的水分、挥发油标准。4.基于样品的灰分、浸出物测定结果,建议增设紫苏叶灰分标准,其中总灰分不得高于16%,酸不溶性灰分含量不得高于7%。建议增设紫苏叶浸出物标准,采用以冷浸法计,水溶性浸出物含量不得低于13%的标准。5.紫苏叶颜色、气味与化学成分、药理作用之间的关联有待进一步深入研究。