子宫肌瘤中垂体肿瘤转化基因-1和碱性成纤维细胞生长因子表达的研究

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目的:检测子宫平滑肌瘤细胞和周围正常子宫肌层细胞中垂体肿瘤转化基因-1(PTTG-1)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达水平,并分析两者的关系,探讨其在子宫肌瘤发生、发展中的作用,从而为临床非手术治疗子宫肌瘤提供新思路。方法:体外原代培养人子宫平滑肌瘤细胞和周围正常子宫肌层细胞并传代,免疫细胞化学SABC法进行细胞学鉴定。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测培养细胞中PTTG-1mRNA和bFGFmRNA的表达,并分析bFGF干预对体外培养子宫平滑肌瘤细胞中的PTTG-1mRNA表达的量效关系和时效关系。结果:(1)成功培养了人子宫平滑肌瘤细胞和周围正常子宫肌层细胞,并且经免疫细胞化学鉴定证实。(2)子宫肌瘤细胞中bFGFmRNA的表达水平(1.220±0.032)显著高于周围正常子宫肌层细胞(1.125±0.048),且差异有显著性(P<0.05)。(3)子宫肌瘤细胞中PTTG-1mRNA的表达水平(1.093±0.036)显著高于周围正常子宫肌层细胞(0.497±0.093),差异有显著性(P<0.001);而在肌瘤或肌层细胞中PTTG-1mRNA的表达水平分别在增殖期(1.087±0.025,0.557±0.070)和分泌期(1.100±0.050,0.437±0.078)比较均无显著差异(P>0.05)。(4)不同浓度bFGF对子宫肌瘤细胞干预,提示bFGF不同浓度干预的子宫肌瘤细胞PTTG-1 mRNA表达有差别,差异有统计学意义(P<0.01);不同浓度两两比较发现,随着浓度的增高,其表达逐渐增加。未加药组(1.113±0.015)与加药组比较,差异均有显著性(P<0.05);加5ng/mL(1.180±0.020)与加10ng/mL、50ng/mL浓度组比较差异亦均有显著性(P<0.05);同样加10ng/mL(1.240±0.043)与加50ng/mL(1.303±0.025)比较差异显著,有统计学意义(P<0.05)。(5)不同时间bFGF对子宫肌瘤细胞干预。提示不同作用时间bFGF干预下,子宫肌瘤细胞中PTTG-1mRNA的表达不同,同样不同浓度作用下其表达亦不同,两者差异显著,均具有统计学意义(P<0.01),且时间和浓度之间存在交互作用(P<0.01)。进一步进行单因素方差分析提示:bFGF未干预组的子宫肌瘤细胞,在各个不同时间点,PTTG-1mRNA表达差别无统计学意义(P>0.05)。而bFGF干预组的子宫肌瘤细胞,随着时间的增加,PTTG-1mRNA表达升高,组间比较差别有统计学意义(P<0.05)。不同时间点两两比较发现:bFGF干预后48h、60h明显高于36h和24h,差异均具有统计学意义(P<0.05),而干预后36h(1.127±0.021)与24h(1.120±0.020)比较无显著性差异(P>0.05),48h(1.173±0.021)与60h(1.213±0.015)比较有显著差异(P<0.05);从而提示:bFGF干预后的子宫肌瘤细胞,随着时间的增加,PTTG-1 mRNA表达逐步升高,且分别在干预后48h、60h差别有显著性。结论:(1)bFGF作为一种重要的生长因子,其在子宫肌瘤细胞中的高表达,提示可能通过促进子宫肌瘤的血管形成和刺激子宫肌瘤细胞的增殖等多种环节促进子宫肌瘤的发展。(2)PTTG-1在子宫肌瘤细胞中的表达明显高于正常子宫肌层细胞,提示PTTG-1基因的异常表达可能与子宫肌瘤的发生有关。在月经周期的增殖期肌瘤或邻近肌层细胞中PTTG-1mRNA的表达较分泌期相应细胞表达略高,但无显著性差异,提示其不明显依赖于月经周期的变化,可能不受卵巢分泌性激素的影响。(3)bFGF呈时间和剂量依赖性刺激子宫肌瘤细胞中PTTG-1的表达,提示两者可能存在正反馈环,协同发挥作用促进子宫肌瘤的发展。(4)PTTG-1mRNA和bFGFmRNA在子宫肌瘤中存在较高水平的表达,为子宫肌瘤的基因治疗提供了新的靶点。
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