DNA末端反应动力学的荧光涨落谱研究

来源 :北京大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:playboy200000
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
自1953年提出DNA的双螺旋结构以来,DNA杂交解链一直是人们研究的热点。其中DNA杂交动力学及其机制是一个越来越受到关注的问题。DNA末端是众多功能的起点,而成为DNA研究的焦点之一。但是末端运动相比较DNA整体行为而言有快速,以及难于检测的特点。传统动力学方法很难进行研究,而近年发展起来的光学荧光技术可以提供高灵敏高速度的检测条件。 荧光涨落谱方法通过控制被检测的分子的数量、检测系统的高灵敏度和对环境噪音的控制而检测到分子运动产生的涨落信号。分子的涨落信号中包含了分子扩散、化学反应和荧光基团自身的变化等各种运动的信息,通过数学的处理提炼出我们关心的化学反应动力学信息。荧光涨落谱的动力学研究摒除了阶跃方法的近似性和阶跃条件,在动态平衡中观察分子的动态行为。 本论文利用荧光涨落谱(FFS:fluorescence fluctuation spectroscopy)和荧光共振能量传递(FRET:fluorescence resonance energy transfer)现象,研究了DNA双链末端在水溶液中的运动,在分子水平上得到了对DNA末端碱基对杂交解链动力学过程的描述。 本论文的工作分为两个部分: ·实验工作 ·针对实验的理论工作论文的主要成果包括: (1)搭建了荧光共聚焦FFS显微镜装置,这套装置将三个可见光波段的激光引入显微镜,可以同时使用或切换不同的激发光;可以灵活地应用于体系的荧光光强、双色荧光、荧光偏振等荧光共聚焦实验。 (2)设计并实现了实时控制并检测溶液温度的实验装置。 (3)将上述两套装置结合起来进行了不同温度下的涨落谱实验。本套装置具有空间稳定性(2小时空间飘移<1μm)、温度稳定性(检测过程中温度波动<0.2℃)和时间稳定性(整个实验过程中约4小时,聚焦体积没有明显变化)。 (4)设计了满足检测条件的荧光标记的DNA样品,设计保证了样品在升温实验中的温度跨度内的稳定性和观测的可靠性。获得大量DNA杂交解链的荧光涨落光谱. (5)本论文的一个特色是针对实验数据所作的理论工作。我们针对自己实验数据与文献数据的差异和参考文献中关于DNA双链杂交解链的理论,提出了自己的物理模型,用这个模型成功地研究处理了自己的实验数据,并找到了文献中实验结果彼此有差异的根源。 新的模型以DNA双链的拉链模型(Zip-model)为出发点,考虑到可能参与末端运动的每一个碱基的贡献;得到以碱基为单位进行描述的势能面。理论与实验研究结合在一起得到以下结论: ·以碱基为单位进行的反应活化焓主要由碱基对的反应焓决定 ·杂交和解链的基元反应的活化熵都是正值,说明过渡态是一个相对松散的状态 ·杂交的活化熵大于解链的活化熵 ·确定DNA末端运动的多通道结论不仅来自于参与运动的碱基数目,更来自于单个碱基杂交解链的多通道势垒结构。我们拓展了相关函数的应用范围:使之不再局限于化学反应的两态假设模型,可以处理多步的复杂体系,不再局限于两种发光状态的假设。
其他文献
本论文较系统地开展了纳米微粒的制备表征及其作为润滑脂添加剂的摩擦学性能与作用机理研究,获得了如下主要研究成果:   1、制备了表面修饰和末修饰纳米二氧化硅。摩擦学试
浸润性是固体表面的一个重要特征,是指当液体和固体表面接触时,液体可以渐渐渗入或附着在固体表面的特性。人工制备特殊浸润性表面具有重要的科学意义和应用价值,特殊浸润性表面
学位
石湖码头位于古泉州港南郊石狮市蚶江镇石湖村半岛上的石湖码头,相传为唐开元年间(713-741年)航海家林銮创建。北距泉州城区27公里,呈曲尺状,南北走向,全长113.50米,曲体长70
9月8日下午,为庆祝香港回归祖国二十周年,迎接党的十九大胜利召开,“紫荆绽放——庆祝香港回归祖国二十周年书法作品巡展”在山东艺术馆开幕。中国书协副主席、山东省文联副
蒋和鸣是一位优秀的美术评论家,也是一位优秀的国画家,更是一位具有独立思想的文化学者。我与和鸣兄相识相交相知至今将近20年,目睹了他从一个卓厉风发的青年才俊到成熟稳健
本论文旨在合成一些新的含氟含硫砌块,研究其性质并用于合成,分为以下几个部分:   第一部分:四氟磺内酯的新应用   四氟磺内酯是一种简单易得的含氟原料,分子中既含有氟原子
研究高阶离散时间线性多智能体系统在有向切换信息拓扑下的状态一致性问题.首先通过提出的线性变换将该一致性问题转换为相应离散时间线性切换系统的渐近稳定性问题.然后借助
本文分别在超临界CO2流体和超声条件下,用有机小分子(AO-80)对炭黑(CB)进行表面接枝反应,制备了有机小分子接枝的炭黑粒子。并通过傅立叶红外光谱(FT-IR),热重分析仪(TGA),激
当今社会,能源和环境问题已成为人类关注的热点,催化剂在能源与环境中的应用也越来越受到人们的重视。石油资源的日益短缺引起人们对丰富天然气资源的关注,在烷烃资源的利用
学位