猪链球菌2型（Streptococcus suis serotype2, SS2）是世界范围内广泛存在的一种重要的人畜共患性病原菌，可引起猪和人的关节炎、脑膜炎、肺炎、败血症、中毒性休克综合征甚至死亡。我国分别于1998年和2005年2次爆发SS2流行，造成大批猪群感染发病及数十人死亡，引起全球关注。SS2的致病机理、检测和防治研究成为公共卫生领域研究的热点。本研究PCR扩增、克隆、原核表达了SS2的溶血素（suilysin, SLY）和胞外蛋白因子（extracellular protein factor, EF）全长基因，获得可溶性的rSLY蛋白与rEF蛋白，分析了rSLY蛋白的溶血活性，制备了rSLY、rEF的亚单位疫苗，建立了SS2SLY、EF蛋白抗体的ELISA检测方法，最后研究了rSLY与rEF对猪流感病毒毒力的影响。1.链球菌2型SLY、EF的原核表达及生物学活性分析以SS2菌HA9801株的全基因组为模板，PCR扩增并克隆猪溶血素（suilysin, SLY）和胞外蛋白因子（extracellular protein factor, EF）全长基因，与原核表达载体pET-28a连接，转入大肠杆菌中诱导表达，收集表达菌体，超声破壁、镍柱纯化获得可溶性的rSLY蛋白与rEF蛋白。建立的rSLY原核表达体系能高效表达可溶性的具有溶血活性的rSLY，建立的rEF原核表达系统能高效表达可溶性的rEF。镍柱纯化制备的rSLY、rEF纯度达电泳纯，分子量约为54ku、110ku。100mL重组菌菌体能纯化出约8mg电泳纯的rSLY与10mg电泳纯的rEF。rSLY具有高溶血活性，溶血比活为4057HU/mg。rSLY对多种动物的红细胞有溶血作用，对猪、兔和豚鼠的红细胞溶血作用最强。rSLY在4℃保存溶血活性最稳定，保存48h溶血活性不降低。在pH6-7和离子强度为500mmol/L时溶血活性最高。本研究获得了高表达量、可溶性的、具有溶血活性的rSLY和大量可溶的rEF蛋白，首次系统研究了不同理化因素对rSLY的生物学活性的影响，为SLY致病机理深入研究及SS2亚单位疫苗、诊断试剂的研制奠定了基础。2.链球菌2型SLY与EF蛋白亚单位疫苗研制及其免疫效力评价分别制备rEF、rSLY、rEF+rSLY、SS2全菌液的油乳剂灭活疫苗，背部皮下多点注射免疫新西兰兔，间隔10d免疫2次，每隔10d采血分离血清，建立ELISA方法检测亚单位疫苗的抗体消长规律。结果表明，免疫亚单位疫苗以后，兔血清中产生了高滴度的相应特异性抗体，且抗体水平均符合抗体的消长规律，即首免以后血液中的抗体水平逐渐升高，二免以后抗体又继续增长，大约10d左右达到最高值，并维持约30d，之后就逐渐下降，最后维持一定的水平。而全菌灭活苗刺激机体产生了较低水平的SLY与EF抗体。3.猪链球菌2型SLY与EF蛋白增强猪流感病毒毒力的研究rSLY、rEF分别与猪流感病毒作用，接种MDCK细胞，观察细胞病变和病毒增殖情况。猪流感病毒在rSLY蛋白的作用下对MDCK细胞产生了轻微CPE，细胞经反复冻融，上清液进行血凝试验检测HA效价为1:16，高于病毒对照组，实验结果表明rSLY蛋白增强了猪流感病毒在MDCK细胞上的毒力。