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[目 的]肺癌的发生、发展是肺癌细胞和肿瘤微环境（tumor microenvironment,TME）相互作用的结果。肿瘤相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts,CAFs）是TME中最主要的基质细胞,可以促进肺腺癌细胞的增殖,但具体机制尚未完全得知。探究CAFs细胞促进肺癌细胞增殖的机制,有助于我们更好地理解CAFs与肺癌细胞之间的相互作用。成纤维细胞活化蛋白（Fibroblast activation protein,FAP）作为CAFs细胞的重要标记物,具有调节多种肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移的功能,同时,本研究结果表明,FAP在CAFs细胞中高表达。因此,本研究将探讨FAP对肺腺癌细胞增殖的促进作用并进一步寻找调控机制,为CAFs细胞促进肺腺癌细胞增殖提供新的解释。[方法]1 FAP的表达对肺腺癌细胞增殖的影响1.1将天然高表达FAP的肺癌相关成纤维细胞（CAF2、CAF3细胞）及对照细胞NF（正常原代成纤维细胞）分别与肺腺癌细胞NCI-H1975直接共培养,检测CAFs细胞能否促进NCI-H1975细胞增殖;1.2使用慢病毒作为载体,构建FAP敲减的CAF2sh-FAP细胞和CAF3sh-FAP细胞,并将其分别与肺腺癌细胞（SPC-A-1及NCI-H1975）进行直接共培养,检测CAFssh-FAP细胞促肺腺癌细胞增殖能力的改变;1.3使用慢病毒作为载体,构建FAP过表达的正常成纤维细胞系FAP-BJ、FAP-HFF及对照细胞系NC-BJ、NC-HFF;将上述两组细胞分别与肺腺癌细胞（SPC-A-1及NCI-H1975）细胞进行直接共培养,检测其对肺腺癌细胞增殖的影响。2 FAP调控肺腺癌细胞增殖的机制研究2.1测序和生物信息学分析,挖掘FAP的下游作用分子SCUBE3。2.2使用Western Blot验证FAP和SCUBE3之间的相关性。2.3 构建 SCUBE3 敲减的 CAFssh-SCUBE3 细胞（CAF2sh-SCUBE3、CAF3sh-SCUBE3）和FAP-HFFsh-SCUBE3细胞,并将其和肺腺癌细胞SPC-A-1直接共培养,检测CAFssh-SCUBE3细胞和FAP-HFF sh-SCUBE3细胞促SPC-A-1增殖能力的改变。2.4使用Western Blot检测和成纤维细胞共培养后的肺腺癌细胞SPC-A-1中SCUBE3的表达情况。2.5使用免疫荧光检测共培养后成纤维细胞和肺腺癌细胞（SPC-A-1、NCI-H1975及Clau-3）中SCUBE3的表达改变。2.6使用Western Blot检测共培养后肺腺癌细胞中p-smad2/3的表达情况。[结 果]1.FAP的表达对肺腺癌细胞增殖的影响1.1在不同的共培养时间及比例下,CAF2及CAF3细胞较对照组NF细胞能更显著地促进肺腺癌细胞NCI-H1975细胞的增殖,差异有统计学意义。1.2在不同的共培养时间及比例下,敲减FAP的CAF2sh-FAP及CAF3sh-FAP细胞与对照组scramble相比,促进肺腺癌细胞（NCI-H1975及SPC-A-1）增殖的能力减弱,差异有统计学意义。1.3在不同的共培养时间及比例下,过表达FAP的正常成纤维细胞FAP-HFF及FAP-BJ相比对照组NC-HFF及NC-BJ细胞,能更显著地促进肺腺癌细胞（NCI-H1975及SPC-A-1）的增殖,差异具有统计学意义。2.FAP调控肺腺癌细胞增殖的机制研究2.1测序及生物信息学分析结果显示:在与CAF2细胞、FAP-BJ细胞共培养后的SPC-A-1细胞中,SCUBE3的表达均明显上调。2.2 Western Blot结果显示:在FAP-BJ及FAP-HFF细胞中,SCUBE3表达显著上调;在CAF2sh-FAP及CAF3sh-FAP细胞中,SCUBE3表达显著下调。2.3在不同的共培养时间及比例下,敲减SCUBE3的CAF2sh-SCUBE3、CAF3sh-SCUBE3及FAP-HFF sh-SCUBE3细胞与对照组scramble相比,促进肺腺癌细胞（SPC-A-1）增殖的能力减弱,差异有统计学意义。2.4 Western Blot结果显示:与成纤维细胞FAP-BJ及FAP-HFF共培养后,肺腺癌细胞SPC-A-1上SCUBE3表达明显上调。2.5免疫荧光结果显示:SPC-A-1与CAF2及FAP-BJ共培养后,三者SCUBE3的表达均上调;NCI-H1975及Clau-3与FAP-HFF共培养后,FAP-HFF细胞中的SCUBE3明显上调。2.6 Western Blot结果显示:与FAP-BJ及FAP-HFF细胞共培养后,肺腺癌细胞SPC-A-1中p-smad2表达增多;与CAF2细胞共培养后,肺腺癌细胞（SPC-A-1及NCI-H1975）中p-smad3的表达增多。[结 论]1.天然高表达FAP的CAFs细胞能够在体外促进肺腺癌细胞NCI-H1975的增殖。2.在CAFs细胞上敲减FAP能够削弱其促肺腺癌细胞增殖的能力;反之,在正常成纤维细胞上过表达FAP能够提升其促肺腺癌细胞增殖的能力。3.FAP促进肺腺癌细胞增殖的机制可能为调节成纤维细胞分泌SCUBE3,从而激活肺腺癌细胞中的smad2/3信号通路。