本论文以原代培养鸡小肠上皮细胞为研究模型,以硫酸铜和蛋氨酸铜为试验材料,研究了日粮铜源及水平对鸡小肠上皮细胞铜转运的影响,研究共包括2个试验：试验一、鸡小肠上皮细胞原代分离培养及纯化；试验二、日粮铜源及水平对鸡小肠上皮细胞的影响。试验一：本试验采用机械剪碎结合胶原酶Ⅳ消化法对鸡小肠上皮细胞进行分离培养,用相差消化-相差贴壁法对鸡小肠上皮细胞进行了纯化。并且通过形态学观察和细胞免疫组织化学的方法对得到的纯化鸡小肠上皮细胞进行鉴定。试验结果表明：应用胶原酶Ⅳ消化法得到的鸡小肠上皮细胞生长状况良好,在倒置显微镜下观察细胞在3-4d贴壁并有少量迁出,7-9d明显增殖,12-15d细胞汇合成片。纯化后得到90%以上纯度的鸡小肠上皮细胞,纯化得到的鸡小肠上皮细胞经过形态学观察和细胞角蛋白18单克隆抗体鉴定结果为阳性。试验二：采用体外分离培养鸡小肠上皮细胞,试验分为两组：硫酸铜组和蛋氨酸铜组,在含10%血清的培养液中分别添加0、15.6、31.2、46.8、62.4、78μ mol/LCu,通过细胞形态学观察、细胞MTT比色法研究了不同浓度铜源对鸡IEC增殖的影响。通过检测细胞培养上清液中LDH的活性变化来考察不同浓度铜源对鸡IEC膜通透性的影响。通过检测细胞培养上清液中AKP活性的变化分析不同浓度铜源对鸡IEC分化成熟的影响。通过检测细胞中各亚细胞器铜含量来探讨细胞内铜转运的情况。研究结果表明：在不同浓度的硫酸铜作用下,硫酸铜可以有效促进细胞增殖,硫酸铜添加组细胞MTTOD570值显著高于对照组(P<0.05),且培养液中添加46.8μmol/LCu在48h时对鸡小肠上皮细胞的增殖作用最强。在不同浓度的蛋氨酸铜作用下,蛋氨酸铜也可以有效促进细胞增殖且以培养液中添加46.8μmol/LCu在36h时对鸡小肠上皮细胞的增殖作用最强。各浓度之间细胞增殖活性差异极显著(P<0.01),各时间段之间细胞增殖活性差异极显著(P<0.01),浓度与时间的交互作用差异极显著(P<0.01)。随着铜源浓度的增加及时间的延长,细胞AKP值呈下降趋势,其中78μ mol/L硫酸铜和蛋氨酸铜处理组可极显著影响鸡IEC成熟分化程度(P<0.01)。随铜源浓度的增加鸡IEC膜通透性逐渐增大,78μ mol/L硫酸铜和蛋氨酸铜处理组时,LDH活性极显著高于其他组(P<0.01)。78μ mol/L和62.4μmol/L硫酸铜处理组细胞核铜含量极显著高于其他硫酸铜处理组(P<0.01),46.8μ mol/L硫酸铜处理组线粒体铜含量极显著高于其他硫酸铜处理组,78μ mol/L硫酸铜处理组溶酶体铜含量极显著高于其他硫酸铜处理组(P<0.01),78μmol/L和62.4μ mol/L硫酸铜处理组细胞浆铜含量极显著高于其他硫酸铜处理组(P<0.01),78μ mol/L和62.4μ mol/L蛋氨酸铜处理组细胞核铜含量极显著高于其他蛋氨酸铜处理组(P<0.01),46.8μ mol/L蛋氨酸铜处理组线粒体铜含量极显著高于其他蛋氨酸铜处理组,78μ mol/L蛋氨酸铜处理组溶酶体铜含量极显著高于其他蛋氨酸铜处理组(P<0.01),15.6μ mol/L和46.8μ mol/L蛋氨酸铜处理组之间溶酶体铜含量差异不显著(P>0.05),78μ mol/L蛋氨酸铜处理组细胞浆铜含量极显著高于其他蛋氨酸铜处理组(P<0.01)。综上所述,本试验成功分离培养并纯化了鸡小肠上皮细胞,加入不同浓度铜源可不同程度的促进鸡小肠上皮细胞增殖；影响鸡小肠上皮细胞成熟分化的程度；增大了鸡小肠上皮细胞膜的通透性。小肠上细胞铜分布在各个亚细胞器内,主要弥散在细胞浆中,当铜源浓度为31.2μmol/L和46.8μ mol/L时,线粒体内铜含量达到最高,随着铜浓度的升高,线粒体内铜含量降低；细胞核、溶酶体、细胞浆内铜含量显著升高。