论文部分内容阅读
巨噬细胞作为先天免疫系统的非特异性免疫细胞,存在于机体所有的组织中。它参与了许多生物过程,从对细胞损伤和感染作出感应,再到骨再生和伤口愈合。同时,巨噬细胞也参与多种免疫代谢疾病的发病机制,包括糖尿病、肥胖症和动脉粥样硬化。巨噬细胞依赖于不同的诱导剂,主要被分为两种极化类型:经典活化型(M1表型)和选择性活化型(M2表型),分别发挥不同的促炎或抗炎的功能。不同极化表型巨噬细胞分别采取不同的信号通路,并激活特定的转录因子,进一步诱导特异性的基因表达。Notch是一种进化上高度保守的信号通路,可在巨噬细胞的发生发展和组织内稳态的过程中,多功能调节细胞与细胞间的交流。研究发现,巨噬细胞活化后Notch表达上调,并通过后续的信号调控巨噬细胞基因表达而影响成熟巨噬细胞的表型与功能。本实验室在前期已经研究了黑灵芝多糖(PSG-1)对巨噬细胞的免疫调节活性及其作用机制。为了进一步研究PSG-1基于Notch信号通路对巨噬细胞极化的调控作用机制,本研究拟在本实验室前期工作基础上,分别从体内和体外两种方式系统地研究PSG-1对M1/M2型巨噬细胞的调控作用及针对Notch信号通路研究其分子机制。运用细胞和分子生物学技术,分别从整体、细胞、分子水平,深入探讨PSG-1通过Notch通路对M1/M2亚型巨噬细胞的调控作用及其机制研究。具体结论如下:1、PSG-1可降低M1型巨噬细胞CD80的表达、吞噬能力和ROS水平。同时PSG-1对M1型巨噬细胞的NO的释放有明显的抑制作用,这种抑制效果呈剂量依赖性。PSG-1可降低促炎因子TNF-α和IL-6的产生,并且促进抗炎因子IL-4和IL-10的分泌。2、PSG-1可增强M2型巨噬细胞CD23的表达、吞噬能力和ROS水平。同时PSG-1可促进促炎细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6的分泌以及NO的释放,抑制抗炎因子IL-4的分泌。提示PSG-1对调控巨噬细胞向M1/M2极化的内稳态平衡有一定的作用。3、PSG-1可增加巨噬细胞表面MR的表达量,降低其吞噬功能和ROS生成水平。同时,PSG-1可减少促炎因子TNF-α的含量。实验证实PSG-1具有抗炎作用,可部分抑制炎症模型小鼠体内的炎症,其机理与PSG-1促进小鼠腹腔巨噬细胞表面MR的表达,抑制巨噬细胞向M1型极化有关。4、阻断Notch信号后,巨噬细胞CD80的表达量减少,细胞的吞噬能力增强,其ROS的生成水平降低。同时,阻断Notch信号后,NO的含量、IL-1β、IL-6和IL-10的分泌水平显著降低。综上所述,本研究证实PSG-1对LPS+IFN-γ/IL-4诱导剂分别诱导巨噬细胞的M1和M2型的巨噬细胞极化,具有调控作用。同时PSG-1在体内具有一定的抗炎作用,其作用机制可能与PSG-1抑制巨噬细胞向M1型极化,促进细胞向M2方向极化有关;此外,PSG-1抑制LPS+IFN-γ介导的巨噬细胞向M1型极化的作用机理与Notch信号通路紧密相关。