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昆虫在处理来自环境的化学信号过程中,嗅觉起着非常重要的作用,其对昆虫的栖息地的选择、觅食、信息传递以及寻找配偶、产卵场所、寄主和猎物等行为都具有重要的作用。感觉神经元膜蛋白(sensory neuron membrane protein, SNMP)是参与昆虫气味识别的重要蛋白之一,在人类基因中属于CD36基因家族成员,是CD36家族中唯一在神经元中发现的基因。家蚕特别是其成虫的嗅觉是研究昆虫化学通讯的理想模型,一直备受关注。我们从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条序列。生物信息学分析发现此序列含一个1569 bp的开放阅读框(open reading frame, ORF),编码一个由522个氨基酸残基组成的蛋白,预测分子量为56.76 kD,等电点为8.58。由于其所编码的蛋白含有一个完整的CD36保守结构域,且与其他物种中的SNMP蛋白有很高的同源性,故将该基因命名为BmSNMP。GenBank登录号：NM 001043721。通过PCR扩增获得的BmSNMP基因,构建原核表达载体pET-32a(+)-polh-tev-BmSNMP,将构建的重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株感受态细胞,经IPTG诱导,高效表达重组融合蛋白。利用多角体蛋白的性质通过pH值的调节和离心及阴离子交换层析纯化蛋白Polh-tev-BmSNMP,纯化的蛋白用TEV酶切。构建转座载体pFastBac HTb-polh-BmSNMP,将polh-BmSNMP基因转座到杆状病毒基因组(Bacmid)上,构建Bacmid-polh-BmSNMP,通过脂质体将Bacmid-polh-BmSNMP转染家蚕BmN细胞获得重组病毒vBmpolh-BmSNMP。重组病毒感染正常家蚕细胞,Western blotting鉴定结果显示多角体融合的BmSNMP蛋白在家蚕细胞中获得成功表达。同理构建重组病毒vBmpolh-BmSNMP-EGFP,感染家蚕细胞后荧光显微镜下观察细胞体内的荧光,发现绿色荧光都在细胞膜附近,表明BmSNMP在真核细胞中表达且为膜蛋白。利用荧光定量PCR技术对BmSNMP基因在家蚕五龄幼虫各组织中的转录情况进行分析。荧光定量PCR结果显示,在五龄幼虫不同组织中BmSNMP基因的转录差异较大,从高到低依次为脂肪体、气门、丝腺、马氏管、中肠、性腺、头部和表皮。上述研究将为进一步研究BmSNMP蛋白的功能打下基础。此外,体外转录dsRNA,脂质体法转染BmN细胞,以MTT法检测干扰前后细胞活力,RNA干扰后的细胞活力上升；将细胞用PI染色后流式细胞仪分析,与对照组相比,干扰后S期细胞数量减少,说明polh融合的BmSNMP基因影响细胞周期,可能与细胞周期的调控有关。