【摘 要】
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原花色素作为葡萄中重要的多酚类化合物,对葡萄抗逆性及人类健康具有重要意义。前期研究表明VvMYBPA1/PA2与葡萄原花色素生物合成密切相关,但其分子调控网络尚不明确。本文采用亚细胞定位、瞬时过表达、酵母双杂交（Y2H）、双分子荧光互补（BiFC）、酵母单杂交（Y1H）等技术探究葡萄中VvMYBPA1/PA2调控葡萄原花色素生物合成的分子机制。主要结果如下:1.亚细胞定位试验表明,葡萄MYBPA1
【基金项目】
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山西省应用基础研究计划（面上自然基金）,外源SA诱导VvMYBPA1/PA2调控葡萄叶片黄烷-3-醇积累分子机制研究（项目编号:201901D111222）； 山西省第五批新兴产业领军人才资助计划,富多酚葡萄生产技术研发； 山西农业大学生物育种工程项目,基于SNPs的多心皮葡萄新品种培育（项目编号:YZGC113）；
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原花色素作为葡萄中重要的多酚类化合物,对葡萄抗逆性及人类健康具有重要意义。前期研究表明VvMYBPA1/PA2与葡萄原花色素生物合成密切相关,但其分子调控网络尚不明确。本文采用亚细胞定位、瞬时过表达、酵母双杂交（Y2H）、双分子荧光互补（BiFC）、酵母单杂交（Y1H）等技术探究葡萄中VvMYBPA1/PA2调控葡萄原花色素生物合成的分子机制。主要结果如下:1.亚细胞定位试验表明,葡萄MYBPA1、MYBPA2蛋白均定位于细胞核。2.以‘早黑宝’葡萄新梢叶片为试材,采用真空渗透的方法,分别过表达VvMYBPA1、VvMYBPA2,并测定原花色素的含量、ANR和LAR酶活及相关基因的表达量,结果表明:过表达VvMYBPA1、VvMYBPA2均促进黄烷-3-醇生物合成相关基因Vv ANR、Vv LAR1转录,ANR、LAR酶活性增强,导致葡萄叶片中表儿茶素、儿茶素的积累,原花色素含量增加。3.酵母双杂交及双分子荧光互补试验显示,MYBPA1、MYBPA2及MYC2蛋白在体内和体外都可以与WDR1互作,但未检测到MYBPA1/PA2与MYC2蛋白的体内互作情况。MYBPA1/MYBPA2可能与WDR1和MYC2共同形成三聚体复合物,从而调控原花色素的合成。4.酵母单杂交结果显示,VvMYBPA1、VvMYBPA2均可以结合ANR、LAR1的启动子。结果表明,VvMYBPA1、VvMYBPA2分别是ANR、LAR1的上游基因。综上,葡萄MYBPA1/MYBPA2能够与WDR1和MYC2形成三聚体复合物,共同调控下游基因ANR、LAR1的表达,从而影响了ANR和LAR酶活性,最终调控了葡萄原花色素的积累。
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