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目的: 探讨HPM对大鼠生殖系统的辐照效应与辐射剂量的关系以及HPM辐照引起生殖细胞凋亡的规律。并在蛋白水平探讨HPM辐照引起生殖细胞凋亡的机制。 方法: 1 采用S波段不同平均功率密度(10mW/cm~2、20mW/cm~2、40mW/cm~2、80mW/cm~2)HPM对固定放置的大鼠进行全身照射,照射时间分别为1min、5min、10min和20min,建立动物模型。照射后分别于6h、24h、48h、72h、5d取材,分别经4%多聚甲醛和3%戊二醛固定,制取睾丸/卵巢组织石蜡标本和透射电镜标本。 2 采用光学显微镜和透射电镜分别进行睾丸/卵巢组织形态学和超微结构观察; 3 应用DNA缺口原位末端标记技术(TUNEL法)检测睾丸/卵巢组织凋亡细胞; 4 采用免疫组织化学S-P法检测睾丸/卵巢组织中Bcl-2及C-myc蛋白的表达。 结果: 1 光镜下雄性大鼠受HPM照射后,实验组与对照组相比,第四军医大学硕士学位论文20mw/c mZ、smin组开始出现轻度炎细胞浸润、组织充血,水肿;IOmin组出现曲精小管生精上皮细胞排列紊乱,畸形精子增多。Zomin组和40 mw/emZ、lmin组可见大鼠梁丸部分曲精小管生精细胞明显坏死脱落。上述改变随平均功率密度增加,照射时间延长而加重。40mw/c mZ、smin组部分曲精小管内几乎无细胞,损伤达坏死极限;透射电镜下翠丸超微结构发生轻度线粒体水肿、内质网扩张是从Zomw/emZ、smin组开始,lomin组可见精原细胞水肿变性,发生凋亡,线粒体呈空泡化;20min组毛细血管内皮细胞肿胀,基底膜分层,断裂。功率增高后的各组均可见部分间质细胞发生变性、凋亡和坏死崩解。对照组无改变。 Zlomw/emZ、Zomw/emZ辐照雄性大鼠smin,6h组、24h组和48h组,大鼠肇丸凋亡生精细胞数量明显高于对照组(P<0.01),以lomw/emZ、smin、6h组凋亡细胞数量最多,达。61.27士5.9)个/5个精曲小管。72h组、sd组及1 omw/em,、Zomw/emZ辐照10min各组与对照组间差别无显著性意义(P>0.05)。 3lomw/emZ、ZomwzemZ辐照雄性大鼠smin、lomin,24h组,Bel一2和e一my。蛋白染色阳性,表现为(+++)。lomwzem,、lomin,4sh组,Bel一2蛋白染色阳性为(++),C一mye蛋白染色(一),ZomwzemZ、smin,6h组,Bel一2和e一myc蛋白染色阳性分别为(++)和(+);其余实验组Bcl一2蛋白和C一myc蛋白均无表达。 4光镜下雌性大鼠受HPM照射后,实验组与对照组相比,40mw/c mZ、smin组开始出现组织水肿、充血和炎细胞浸润,4omw/emZ、10min组开始见卵巢出现损伤,卵泡细胞分离明显,40mw/emZ、Zomin组及somw/emZ、lmin组、smin组和10min组出现卵泡内层细胞变性,发育不同阶段的卵泡发生卵泡闭锁。黄体细胞发生凋亡。20min组则出现组织出血和部分粒层细胞、间质细胞出现明显坏死崩解。随照射功率密度增加照射时间延长上述病理变化越明显。透射电镜下超微结构发生轻度线粒体水肿、内质网扩张,间质内炎细胞浸润是从40mw/c mZ、smin组开始,随照射时间延长,功率密度增加,各组均可见生殖细胞发生变性、凋亡改变;第四军医大学硕士学位论文80mw/c mZ、20min组可见卵母细胞内次级溶酶体增多,微绒毛发生肿胀。间质细胞凋亡、坏死。Zomw/emZ各组、40mw/emZ、lmin组及对照组无改变。 s4OmW/emZ的HPM辐照雌性大鼠zomin,6h组、24h组、48h组sd组凋亡细胞数目明显升高,与对照组相比差别具有非常显著性意义(P<0.01)。其余实验组与对照组相比差别无意义(P>.05)。 6 HPM辐照大鼠后各24h实验组,Bcl一2和C一my。蛋白染色呈(++一+++),4omwzemZ、smin,6h组,Bel一2蛋白染色阳性为(++),C一my。蛋白染色(+),其余实验组二者均无表达。 结论: 1 HPM辐照可导致大鼠皋丸组织和皋丸组织形态发生明显的病理性改变。对辜丸组织,HPM辐照Zomw/emZ、Zomin或4omwzemZ、lmin,卵巢组织达到somwzcmZ、lomin,即可对生殖细胞有致死作用。在相同的辐照条件下,卵巢组织对辐射的耐受能力强于攀丸组织。 2在一定的辐照剂量与辐照时间范围内,HPM可诱导大鼠辜丸/卵巢组织发生凋亡,并和辐照后取材时间有关。10mw/c mZ、20mw/cmZHPM辐照雄鼠smin,40mw/cmZHPM辐照雌鼠10min即可触发生殖细胞凋亡数目增加,影响大鼠生殖功能。 3不同功率密度的HPM辐照雌鼠和雄鼠,照后24小时,c一myc及bcl一2蛋白的活化和表达增加,可能是HPM诱导大鼠生殖细胞凋亡的机制之一。 4在本实验条件下,HPM对大鼠的甚至系统造成损伤存在着剂量效应关系。HPM的辐照时间和辐照的功率密度存在协同作用(S”etgism aetion),导致大鼠生殖细胞的损伤。 本实验的结果为环境和职业中的微波辐射安全防护标准的制定,有关危害机制的解释提供了生物学研究资料。