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弓形虫(Toxoplasma gondii)呈世界性分布且可以感染几乎所有恒温动物。本研究于2016~2018年从河南郑州、商丘、开封和濮阳地区的动物园采集了9只老虎和1只薮猫的18份肌肉组织、10份血清或组织洗液、141份粪便样品。采用MAT对其血清进行弓形虫抗体检测,并对性别和年龄进行风险因子分析。结果发现:总阳性率为90%(9/10)。在老虎膈肌压片观察到了疑似弓形虫的包囊。肌肉组织中弓形虫PCR检测结果为14.3%(1/7)。141份老虎粪便显微镜检查和PCR均未检测到弓形虫。
动物园老虎和薮猫横纹肌或心肌均通过BALB/c小鼠和1FN-γ-/-鼠进行生物分离,成功分离2株虎源及1株薮猫源弓形虫虫株。分别命名为TgTigerCHn1、TgTigerCHn2、TgServalCHn1。经CV-1细胞培养得到弓形虫分离株的速殖子并提取DNA,采用PCR-RFLP鉴别TgTigerCHn1和TgTigerCHn2基因型为ToxoDB#9(Chinese1),TgServalCHn1基因型为ToxoDB#20。分析ROP5、ROP16、ROP17、ROP18、GRA15多态基因位点预测虎源和薮猫源弓形虫分离株为中强毒和弱毒虫株。
选择梯度浓度TgTigerCHn1、TgTigerCHn2和TgServalCHn1速殖子腹腔注射BALB/c小鼠后,感染103个弓形虫浓度下的死亡率分别为47%、100%和0。BALB/c小鼠感染106个TgTigerCHn1和TgTigerCHn2弓形虫后100%死亡。BALB/c小鼠感染106个TgServalCHn1弓形虫存活时问超过60DP1。此外,BALB/c小鼠感染TgTigerCHn2虫株后,脾脏和淋巴结淋巴细胞坏死,弓形虫虫体抗原弥散性分布;间质性肺炎;肝细胞空泡变性及坏死,淋巴细胞弥散性浸润;大脑可见严重的脑膜炎和血管袖套现象。IFN-γ-/-小鼠主要病理损伤为肝脏有坏死灶,脾脏和淋巴结实质细胞的坏死和减少。IHC显示,BALB/c小鼠大脑的虫体抗原显著多于IFN-γ-/-小鼠(P<0.01)。
本研究检测河南地区动物园老虎和薮猫的弓形虫抗体,较高的阳性率(90%)说明其排泄过卵囊,而环境中的卵囊随着雨水或其它机械性传播将威胁其它野生动物、游客、幼童和管理员的健康。组织学和生物学接种结果直接并有力的证明动物园猫科动物广泛感染弓形虫。基因型为ToxoDB#9和ToxoDB#20的虎源及薮猫源分离株的获得丰富了河南地区弓形虫的基因型多样性。
动物园老虎和薮猫横纹肌或心肌均通过BALB/c小鼠和1FN-γ-/-鼠进行生物分离,成功分离2株虎源及1株薮猫源弓形虫虫株。分别命名为TgTigerCHn1、TgTigerCHn2、TgServalCHn1。经CV-1细胞培养得到弓形虫分离株的速殖子并提取DNA,采用PCR-RFLP鉴别TgTigerCHn1和TgTigerCHn2基因型为ToxoDB#9(Chinese1),TgServalCHn1基因型为ToxoDB#20。分析ROP5、ROP16、ROP17、ROP18、GRA15多态基因位点预测虎源和薮猫源弓形虫分离株为中强毒和弱毒虫株。
选择梯度浓度TgTigerCHn1、TgTigerCHn2和TgServalCHn1速殖子腹腔注射BALB/c小鼠后,感染103个弓形虫浓度下的死亡率分别为47%、100%和0。BALB/c小鼠感染106个TgTigerCHn1和TgTigerCHn2弓形虫后100%死亡。BALB/c小鼠感染106个TgServalCHn1弓形虫存活时问超过60DP1。此外,BALB/c小鼠感染TgTigerCHn2虫株后,脾脏和淋巴结淋巴细胞坏死,弓形虫虫体抗原弥散性分布;间质性肺炎;肝细胞空泡变性及坏死,淋巴细胞弥散性浸润;大脑可见严重的脑膜炎和血管袖套现象。IFN-γ-/-小鼠主要病理损伤为肝脏有坏死灶,脾脏和淋巴结实质细胞的坏死和减少。IHC显示,BALB/c小鼠大脑的虫体抗原显著多于IFN-γ-/-小鼠(P<0.01)。
本研究检测河南地区动物园老虎和薮猫的弓形虫抗体,较高的阳性率(90%)说明其排泄过卵囊,而环境中的卵囊随着雨水或其它机械性传播将威胁其它野生动物、游客、幼童和管理员的健康。组织学和生物学接种结果直接并有力的证明动物园猫科动物广泛感染弓形虫。基因型为ToxoDB#9和ToxoDB#20的虎源及薮猫源分离株的获得丰富了河南地区弓形虫的基因型多样性。