猪附红细胞体病是由猪附红细胞体(Eperythrozoon suis)寄生于血浆、红细胞表面或侵入红细胞内部,主要以贫血、黄疸、发热等临床症状为特征的血液性传染病。目前,对猪附红细胞体病的防治尚无有效方法,而且在NCBI上可供研究的猪附红细胞体基因甚少。为此,本试验对构建的猪附红细胞体基因组文库进行筛选,经琼脂糖凝胶电泳及测序分析,获得一个全长为929bp,且在NCBI上无同源性的基因片段,应用ORF Finder分析,发现该基因片段含有438bp的完整开放阅读框,编码145个氨基酸,与已知的猪附红细胞体序列无同源性,暂命名为“猪附红细胞体JL-2”。对ORF编码蛋白质进行同源性分析显示,未发现具有同源性的蛋白,推测该蛋白很可能是猪附红细胞体特有的一种蛋白。通过对“猪附红细胞体JL-2”基因的生物信息学分析,根据其最大ORF设计了一对带有双酶切位点的特异性引物进行PCR扩增,并与原核表达载体pGEX-4T-1连接,经大肠杆菌BL-21感受态细胞转化、IPTG诱导表达以及SDS-PAGE电泳和Western blotting分析,该基因能够在大肠杆菌BL-21中高效表达,表达重组蛋白的分子量为40.5kDa,该重组蛋白能被猪附红细胞体阳性血清昕识别,并具有较好的反应原性。纯化猪附红细胞体JL-2基因重组蛋白,以此为抗原,建立了猪附红细胞体重组蛋白间接ELISA检测方法。通过对ELISA各反应条件的筛选,确定了抗原的最佳包被浓度为20.5μg/mL,4℃过夜；待检血清最佳稀释度为1：80,37℃作用1h; HRP-兔抗猪IgG为1:2000倍稀释,37℃作用1h：底物于37℃显色15min；经特异性、重复性以及临床血清样本的检测试验表明,建立的间接ELISA检测方法特异性强、重复性好、准确率高。本试验为猪附红细胞体的深入研究提供了新的基因片段,为该基因的功能研究提供了基础材料,同时也为该病的血清学诊断提供了一种简单经济、快速有效的方法。