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微小RNA(microRNA)参与了 2型糖尿病(T2D)发生发展的多个环节,调节胰岛β细胞功能的microRNA已成为研究T2D的核心领域。发现人类胰岛中microRNA的表达水平,并探讨对胰岛β细胞发育和增殖过程中起关键作用的microRNA,可以为研究预防、诊断以及治疗T2D的新靶点奠定实验基础和理论前提。本研究通过灌注消化和连续梯度离心的方式,分离出人类的原代胰岛;提取人类胰岛总RNA,利用Illumina测序技术平台对人类胰岛进行microRNA测序,筛选并分析人类胰岛中microRNA的表达谱,采用real-time qPCR芯片技术对测序结果进行验证;选择人类胰岛中高表达的microRNA—miR-148进行功能分析和机制研究,将miR-148的抑制剂(Anti-miR-148)转染入小鼠胰岛打散细胞和胰岛β细胞系MIN6中,观察Anti-miR-148对胰岛β细胞增殖和凋亡的影响;利用real-time qPCR和western-blot技术筛选miR-148可能作用的靶基因,并用luciferase报告基因的方法检验miR-148是否与所筛选靶基因的3’UTR互补结合。研究结果显示,通过灌注消化和连续梯度离心的方法可以分离出纯度和质量都较高的人类原代胰岛;对人类胰岛进行microRNAs测序分析,发现了约944种在人类胰岛中表达的microRNAs,其中,拷贝数在400以上的有150余种;测序分析和real-time qPCR芯片验证结果基本一致;miR-148在人类胰岛中具有较高的表达丰度,Anti-miR-148可显著降低胰岛β细胞内源性miR-148的表达,与对照组相比较,Anti-miR-148组细胞生长减慢、S期细胞的比例减少,而早期凋亡细胞的比例增加;Real-time qPCR和western-blot结果显示,Bim,P27和Pten基因在mRNA和蛋白水平的表达均显著增加;Luciferase报告基因验证结果显示,miR-148可以与Bim,P27和Pten基因的3’UTR互补结合。综上,我们测序分析发现了近千种在人类胰岛中表达的microRNAs,多数microRNAs在胰岛β细胞中的功能尚不清楚;miR-148在人类胰岛中的表达水平非常高,它可以影响胰岛β细胞的增殖和凋亡,此作用可能是通过调控靶基因Bim,Pten和P27的表达水平实现的。