【摘 要】
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目的:盆腔脏器脱垂（Pelvic organ prolapse,POP）指的是由于女性盆底支持组织力量薄弱,盆腔内脏器经由阴道脱出于体外的一组疾病。盆腔脏器脱垂的发生通常与盆底结构支持系统松弛息息相关。从分子生物学角度探寻该疾病的发病机制,从而实现对疾病的早期诊断及早期干预,可以延缓疾病进程,减轻患者的痛苦,具有较重要的临床意义。在针对人体多个系统的多项研究结果显示,IGF-1的表达与成纤维细胞胶
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目的:盆腔脏器脱垂（Pelvic organ prolapse,POP）指的是由于女性盆底支持组织力量薄弱,盆腔内脏器经由阴道脱出于体外的一组疾病。盆腔脏器脱垂的发生通常与盆底结构支持系统松弛息息相关。从分子生物学角度探寻该疾病的发病机制,从而实现对疾病的早期诊断及早期干预,可以延缓疾病进程,减轻患者的痛苦,具有较重要的临床意义。在针对人体多个系统的多项研究结果显示,IGF-1的表达与成纤维细胞胶原蛋白表达程度相关。因此,我们推测,IGF-1表达异常可能与盆腔脏器脱垂的发病存在相关性。根据生信学分析结果,我们预测Lnc00839与IGF-1可能存在靶向调控关系,从而影响盆底结构中成纤维细胞胶原蛋白的表达。本文拟探寻IGF-1与盆腔脏器脱垂之间的关系,并进一步研究Lnc00839在盆腔脏器脱垂这一疾病中发挥的作用,以寻找与盆腔脏器脱垂相关的分子生物学机制,为疾病的早期诊断及早期干预提供潜在解决方案。方法:1.利用PCR及Western-blot等方法,检测并比较脱垂组患者阴道壁组织中与正常对照组患者阴道壁组织中Lnc00839、mi R-19-3p、IGF-1,IGF-1R,COL-1,COL-3的表达情况,并与器官脱垂临床严重程度进行相关性分析。2.对脱垂组及对照组组织中凋亡及自噬情况进行分析:TUNEL检测两组间组织凋亡情况,Western-blot检测两组中自噬标记物Beclin1、LC3II/I及凋亡标记物Bax、Bcl-2的表达情况。3.上调IGF-1后,检测下游COL-1及LC3II/I表达情况,上调Lnc00839后,检测下游IGF-1及IGF-1R表达情况。4.实验验证Lnc00839与mi R-19-3p的靶向作用关系。5.实验验证mi R-19-3p与IGF-1的靶向作用关系。6.Western-blot检测脱垂组及对照组中AKT,m TOR,p70s6k,p-AKT,p-m TOR,p-p70s6k的表达情况。7.构建高转Lnc00839的成纤维细胞,并滴加不同浓度的IGF-1后,检测下游通路蛋白AKT,m TOR,p70s6k,p-AKT,p-m TOR,p-p70s6k的表达情况,同时检测下游COL-1,IGF-1和IGF-1R的表达情况及自噬标记物表达情况。结果:1.在POP患者的阴道壁组织中,Lnc00839,COL-1及IGF-1,IGF-1R表达水平降低,且其表达水平与盆腔脏器脱垂严重程度呈负相关,mi R-19-3p表达水平增高,其表达水平与脱垂严重程度呈正相关。2.POP患者的阴道壁组织中自噬水平和凋亡水平增加,IGF-1可以通过抑制细胞过度自噬水平,促进COL-1的分泌。3.上调IGF-1后,下游COL-1表达水平增加,Lnc00839可以上调阴道壁成纤维细胞IGF-1表达。4.Lnc00839可以与mi R-19-3p靶向结合。5.mi R-19-3p与IGF-1可以靶向结合,从而抑制Lnc00839对下游IGF-1及COL-1的上调作用。mi R-19-3p通过促进细胞凋亡与过度自噬调节成纤维细胞的COL-1表达。6.AKT-m TOR-p70s6k是IGF-1调控成纤维细胞COL-1分泌的通路。7.Lnc00839调控IGF-1表达最终也可以经过AKT-m TOR-p70s6k通路调控成纤维细胞自噬水平,从而调控成纤维细胞COL-1分泌。结论:1.Lnc00839在盆腔脏器脱垂的阴道壁组织中表达降低,且与盆腔脏器严重程度呈负相关。2.IGF-1与COL-1的低表达可能和盆腔脏器脱垂发病相关。3.Lnc00839可以正向调控IGF-1的表达。成纤维细胞的过度自噬和凋亡可能是盆腔脏器脱垂发生的病理生理基础。4.Lnc00839可能通过与mi R-19-3p相互作用靶向作用于IGF-1,调节成纤维细胞的自噬及凋亡水平,从而COL-1的表达水平。5.Lnc00839通过mi R-19-3p靶向作用于IGF-1后,通过AKT-m TOR-p70s6k通路作用于成纤维细胞,从而调节成纤维细胞COL-1的表达。
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