【摘 要】
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目的:通过分析肺癌（Lung Cancer,LC）患者血浆及细胞系中微小RNA4725-5p（miR-4725-5p）的表达水平,及其通过下游靶基因CDH1对肺癌增殖、迁移及顺铂耐药的调控,初步明确miR-4725-5p在肺癌诊断、治疗中的潜在临床意义,及其调控肺癌恶性表型及顺铂耐药的分子机制。方法:1、通过实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR）
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目的:通过分析肺癌（Lung Cancer,LC）患者血浆及细胞系中微小RNA4725-5p（miR-4725-5p）的表达水平,及其通过下游靶基因CDH1对肺癌增殖、迁移及顺铂耐药的调控,初步明确miR-4725-5p在肺癌诊断、治疗中的潜在临床意义,及其调控肺癌恶性表型及顺铂耐药的分子机制。方法:1、通过实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR）的实验方法定量检测82例肺癌患者及114例健康体检者外周血血浆标本中miR-4725-5p的表达量;2、通过qRT-PCR的实验方法定量检测肺腺癌细胞系A549和人肺正常上皮细胞系BEAS-2B中miR-4725-5p的表达量;3、使用miR-4725-5p mimic、miR-4725-5p mimic NC、miR-4725-5p inhibitor、miR-4725-5p inhibitor NC转染A549细胞系,检测转染后miR-4725-5p表达情况,用克隆形成实验、CCK-8试剂盒及划痕实验检测细胞的增殖和迁移能力;4、使用miR-4725-5p mimic、miR-4725-5p mimic NC、miR-4725-5p inhibitor、miR-4725-5p inhibitor NC转染A549细胞系,联合或不联合顺铂处理,用克隆形成实验、CCK-8试剂盒及划痕实验检测细胞的增殖和迁移能力;5、通过starbase3.0v和Targetscan等生物信息学预测软件预测该miRNA的下游靶基因;6、通过KM Plotter数据库分析靶基因与肺癌患者预后的相关性;7、通过western blot检测miRNA mimic或inhibitor转染后,A549细胞中miR-4725-5p的靶基因编码蛋白的表达情况。结果:1、相对于健康体检人群,肺癌患者血浆中的miR-4725-5p水平明显增高,并且化疗耐药的肺癌患者血浆中的miR-4725-5p水平明显高于其在化疗敏感的肺癌患者血浆中的水平;2、肺腺癌细胞系A549中的miR-4725-5p表达水平明显高于人肺正常上皮细胞系BEAS-2B;3、转染miR-4725-5p mimic的A549细胞中miR-4725-5p的表达水平明显增加,转染miR-4725-5p inhibitor的A549细胞中,miR-4725-5p表达水平明显降低;转染miR-4725-5p mimic的A549细胞克隆形成能力、增殖活性及迁移能力明显高于转染miR-4725-5p mimic NC的A549细胞;转染miR-4725-5p inhibitor的A549细胞克隆形成能力、增殖活性及迁移能力明显低于转染miR-4725-5p inhibitor NC的A549细胞;4、转染miR-4725-5p mimic的A549细胞,在顺铂处理下的克隆形成能力、增殖活性及迁移能力明显高于转染miR-4725-5p mimic NC的A549细胞,表明过表达miR-4725-5p降低肺癌细胞对顺铂治疗的敏感性;转染miR-4725-5p inhibitor的A549细胞,在顺铂处理下的克隆形成能力、增殖活性及迁移能力明显低于转染miR-4725-5p inhibitor NC的A549细胞,表明抑制miR-4725-5p增加肺癌细胞对顺铂治疗的敏感性;5、数据库预测得到钙依赖黏附蛋白1基因（Calcium-dependent adhesion protein 1,CDH1）为miR-4725-5p下游靶基因之一;6、CDH1表达水平降低与肺癌患者预后不良相关;7、相对于对照组,转染miR-4725-5p mimic或inhibitor分别降低或增高CDH1编码蛋白E钙黏素的表达水平。结论:通过上述研究发现miR-4725-5p在肺癌患者血浆及细胞系中高表达,并可能通过调控靶基因CDH1的表达,从而促进肺癌细胞的增殖、迁移及对顺铂治疗的耐药性。
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