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1.饲料中牛磺酸水平对斜带石斑鱼生长性能、抗氧化能力的影响配制添加0、0.5%、1%、1.5%牛磺酸的饲料投喂斜带石斑鱼幼鱼,通过56天的养殖实验,测定斜带石斑鱼生长性能各相关指标:SR、WGR、DFI、FE、SGR和CF。结果发现,饲料中添加牛磺酸具有明显的促生长作用。当牛磺酸缺乏时,石斑鱼表现出较差的生长性能。牛磺酸添加组斜带石斑鱼DFI随着牛磺酸添加量的增加而升高,且在1%牛磺酸水平下达到最高,与对照组差异显著(P<0.05)。FE的变化趋势与DFI相同。WGR和SGR随着牛磺酸水平升高先升后降,在牛磺酸水平为1%时最高。因此,1%的牛磺酸水平对于斜带石斑鱼的促生长作用最为明显。饲料中添加不同水平的牛磺酸均能够显著提高肝脏、肌肉、血清中主要抗氧化酶:SOD、CAT、GSH-Px活性以及T-AOC,显著降低MDA含量。其中,饲料中添加1%的牛磺酸对于斜带石斑鱼的抗氧化能力提高以及脂质过氧化产物的清除效果最佳,并且与对照组、其余实验组差异显著(P<0.05)。这与生长性能实验的效果相一致,因此饲料中1%的牛磺酸添加量最有利于斜带石斑鱼生长及抗氧化能力的提高。2.斜带石斑鱼原代培养肝细胞四氯化碳氧化损伤模型的建立本实验利用肝细胞体外培养模型,采用CCl4作为氧化损伤毒物构建肝细胞四氯化碳氧化损伤模型,研究不同CCl4浓度(0、4、8、16 mM)在不同作用时间(2、4、8 h)下对于斜带石斑鱼离体肝细胞的损伤作用。实验采用MTT法检测肝细胞活性,并测定肝细胞培养上清液中GPT、GOT和LDH活性以及抗氧化相关指标(SOD、CAT、GSH-Px、MDA)。结果显示,不同浓度CCl4均能够降低细胞活力,4 mM时与8 mM时差异不显著(P>0.05),但8mM时显著高于16 mM(P<0.05)。CCl4作用4 h时肝细胞活力降低程度显著低于作用8 h(P<0.05)。CCl4浓度为8 mM时作用4 h能够显著增加GPT、GOT、LDH的释放量(P<0.05)。8 mM的CCl4作用4 h能够显著降低SOD、CAT活性(P<0.05),显著提高MDA含量(P<0.05)。因此,8 mM可作为CCl4氧化损伤模型的最佳损伤浓度,CCl4作用4 h可作为损伤实验最适作用时间,以此作为牛磺酸保护作用的实验依据。3.牛磺酸对斜带石斑鱼原代培养肝细胞氧化损伤的保护作用本实验以CCl4肝细胞氧化损伤模型为基础,采用牛磺酸对受损的斜带石斑鱼肝细胞进行预先保护和损伤修复。采用三种不同的作用方式加入牛磺酸(牛磺酸前处理:CCl4损伤肝细胞之前加入牛磺酸;牛磺酸前后处理:CCl4损伤肝细胞前后均加入牛磺酸;牛磺酸后处理:CCl4损伤肝细胞之后加入牛磺酸),每种作用方式加入三种不同浓度牛磺酸:5 mM、10 mM、15 mM。同时,设立空白对照组、CCl4对照组、牛磺酸对照组,对照组和处理组均作用相同时间。通过测定培养上清液中肝细胞活力,肝细胞功能指标,抗氧化酶活力以及抗氧化酶基因表达量,探究离体条件下牛磺酸对斜带石斑鱼肝细胞保护作用,确定牛磺酸最佳作用方式和最适浓度。结果表明,牛磺酸的加入均能够显著提高斜带石斑鱼肝细胞的活力(P<0.05)。牛磺酸前处理组和牛磺酸前后处理组在浓度为10 mM时细胞活力最高,而牛磺酸后处理组则在15 mM时最高。牛磺酸前处理组和牛磺酸前后处理组在10 mM牛磺酸浓度时能够显著抑制肝细胞GPT、GOT、LDH的活性(P<0.05),牛磺酸后处理组在浓度为15 mM时GPT、GOT和LDH活性才显著下降。抗氧化能力方面,牛磺酸对照组能够显著提高SOD、CAT酶活性(P<0.05),牛磺酸前处理组和前后处理组的SOD酶活性随着牛磺酸浓度升高呈现先升高后降低的趋势,在10mM时活性最高。牛磺酸后处理组SOD酶活性则随牛磺酸浓度升高逐渐上升,最大值出现在15 mM时,并且显著高于5 m M和10 mM(P<0.05)。CAT活性的变化趋势与SOD相似。GSH-Px酶活性在牛磺酸前处理组和前后处理组随着牛磺酸浓度升高出现先升高后降低,10mM时活性最高,且显著高于5 mM(P<0.05),牛磺酸后处理组则在15 mM时活性最高。MDA含量在CCl4组时最高,且显著高于其余各组(P<0.05)。牛磺酸的加入显著降低了MDA含量(P<0.05),牛磺酸前处理组、后处理组和前后处理组的MDA含量均在10mM浓度时最低。由抗氧化酶基因表达量可以看出,CCl4显著下调了抗氧化酶基因的表达水平(P<0.05),牛磺酸的加入能够显著影响抗氧化酶基因的表达水平(P<0.05)。SOD、CAT酶基因表达量随牛磺酸浓度升高先升高后降低,10 mM的表达量最高。GSH-Px酶基因表达量则随着牛磺酸浓度升高而升高,15 mM时最高,但与10 mM时差异不显著(P>0.05)。结果显示:牛磺酸能够显著提高因CCl4氧化损伤造成的斜带石斑鱼肝细胞抗氧化能力的下降。综合比较各种处理方式和作用浓度,发现牛磺酸前后处理的作用方式,10 mM的牛磺酸浓度是牛磺酸保护肝细胞的最适宜组合。