【摘 要】
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目的研究淫羊藿苷对破骨细胞分化和鸟嘌呤核苷酸结合蛋白亚基α13（Gα13）介导的信号通路的影响,探讨淫羊藿苷治疗骨质疏松的可能分子机制。方法单核巨噬细胞（bone marrow derived macrophages,BMMs）从6到8周的雄性C57/BL6小鼠骨髓中提取后进行原代培养,使用核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear kappa B li
【基金项目】
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国家自然科学基金项目的资助（No.81472106）；
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目的研究淫羊藿苷对破骨细胞分化和鸟嘌呤核苷酸结合蛋白亚基α13（Gα13）介导的信号通路的影响,探讨淫羊藿苷治疗骨质疏松的可能分子机制。方法单核巨噬细胞（bone marrow derived macrophages,BMMs）从6到8周的雄性C57/BL6小鼠骨髓中提取后进行原代培养,使用核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear kappa B ligand,RANKL）和巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colonystlimulating factor,M-CSF）将BMMs诱导成破骨细胞。同时使用不同浓度（0μM、1μM、10μM）的淫羊藿苷进行干预,采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）和鬼笔环肽染色、q PCR和Western blot等实验分析淫羊藿苷对破骨细胞形成及其对Gα13基因和Akt-GSK3β-NFATc1信号通路相关基因表达的影响。同时,用ELISA法检测淫羊藿苷干预后细胞外液20-羟-二十烷四烯酸（20-hydroxyeicosatetraenoic acid,20-HETE）浓度,使用不同浓度（0μM、1μM、2μM）的20-HETE及20-HETE抑制剂进行干预,采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）和鬼笔环肽染色、q PCR法等实验探索20-羟二十烷四烯酸是否参与Gα13蛋白的上游调控。结果TRAP染色和鬼笔环肽染色显示淫羊藿苷可显著抑制破骨细胞形成（P＜0.05）。淫羊藿苷显著促进Gα13基因及蛋白表达（P＜0.05）,显著抑制Akt-GSK3β-NFATc1信号通路相关基因及蛋白的表达（P＜0.05）。同时,淫羊藿苷可以促进20-HETE的表达。20-HETE可以抑制破骨细胞,促进Gα13基因表达,同时20-HETE抑制剂削弱淫羊藿苷对破骨细胞形成的抑制作用。结论Gα13可能参与了调控淫羊藿苷抑制破骨细胞形成的相关通路,淫羊藿苷可能是通过促进负调控因子Gα13的表达,从而抑制其下游Akt-GSK3β-NFATc1信号通路来抑制破骨细胞形成。20-HETE是淫羊藿苷调节Gα13的中间产物。
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