【摘 要】
：
一、研究背景冠状动脉粥样硬化性心脏病是冠状动脉血管发生动脉粥样硬化病变而引起的心脏病。动脉粥样硬化（AS）与内皮细胞、巨噬细胞和血管平滑肌细胞的功能密切相关。而动脉粥样硬化发生的潜在分子机制仍不清楚。研究表明内皮损伤是动脉粥样硬化过程的关键事件。氧化低密度脂蛋白（oxLDL）能诱导内皮细胞（ECs）的激活和功能障碍。目前有关LncRNA在ECs参与冠状动脉粥样硬化中的研究很少,LncRNA在冠状动
论文部分内容阅读
一、研究背景冠状动脉粥样硬化性心脏病是冠状动脉血管发生动脉粥样硬化病变而引起的心脏病。动脉粥样硬化（AS）与内皮细胞、巨噬细胞和血管平滑肌细胞的功能密切相关。而动脉粥样硬化发生的潜在分子机制仍不清楚。研究表明内皮损伤是动脉粥样硬化过程的关键事件。氧化低密度脂蛋白（oxLDL）能诱导内皮细胞（ECs）的激活和功能障碍。目前有关LncRNA在ECs参与冠状动脉粥样硬化中的研究很少,LncRNA在冠状动脉发生AS的过程中发挥何种作用尚未明确。二、研究目的本研究使用oxLDL和人冠状动脉内皮细胞（Human coronary artery endothelial cells,HCAECs）构建冠状动脉内皮细胞损伤模型,探讨COLCA1/hsa-miR-371a-5p/SPP1 调控通路在 oxLDL 损伤 HCAECs 中的作用机制,为冠状动脉粥样硬化的预防及治疗提供理论依据。三、研究方法1.利用oxLDL刺激HCAECs构建冠状动脉内皮细胞损伤模型,油红O染色、流式检测术,cck8实验,划痕实验,Elisa等实验验证造模成功。利用全转录组测序技术（Total RNA-seq）检测oxLDL刺激前后全转录组表达变化,并进行生信分析。2.qPCR实验在细胞水平检测oxLDL刺激前后COLCA1的表达变化。3.使用siRNA对COLCA1进行干扰,并通过流式细胞术,划痕实验确认COCAL1在oxLDL导致HCAECs发生氧化应激以及伤口愈合能力受到损伤中发挥的作用。4.利用starbase数据库结合全转录测序结果对COLCA1的下游作用基因进行预测,并进行qPCR实验、双荧光素酶靶点验证实验以及恢复实验验证hsa-miR-371a-5p是COLCA1的下游作用靶点。5.利用starbase数据库结合全转录测序结果对hsa-miR-371a-5p的下游靶基因进行预测,并进行qPCR实验、双荧光素酶靶点验证实验验证SPP1是hsa-miR-3 71 a-5p的下游靶基因。四、研究结果1.冠状动脉内皮细胞损伤模型的脂滴增加,活性氧ROS含量上升,细胞凋亡水平上升,增殖能力变弱,伤口愈合能力降低,炎症因子IL-6表达上升。2.本研究使用3对oxLDL刺激前后的HCAECs样品进行全转录组测序,共测得209个显著差异表达的mRNA,107个显著差异表达的LncRNA,43个显著差异表达的miRNA。3.qPCR实验验证冠状动脉内皮细胞损伤模型中COLCA1表达上升。4.我们筛选出有效干扰COLCA1的siRNA并进行后续实验。检测结果显示,正常状态下,COLCA1表达被抑制后,HCAECs的伤口愈合能力显著增强,细胞凋亡水平以及活性氧含量无显著变化。冠状动脉内皮细胞损伤模型中COLCA1表达被抑制后,活性氧的含量接近正常水平,细胞存活率明显好转,伤口愈合能力得到恢复。确认了 COLCA1在oxLDL导致HCAECs发生氧化应激以及伤口愈合能力受到损伤中发挥的作用。5.双荧光素酶实验确认了 hsa-miR-371a-5p与COLCA1之间存在作用靶点,qPCR实验确认HCAECs受到oxLDL刺激时,hsa-miR-371a-5p表达下降,而COLCA1被干扰时,hsa-miR-371a-5p表达上升。当COLCA1被干扰,我们同时抑制hsa-miR-371a-5p的表达,则无法缓解oxLDL带来的损伤。确认了COLCA1通过ceRNA机制吸附hsa-miR-371a-5p来诱导氧化应激、细胞凋亡以及损害伤口愈合能力。6.qPCR实验及双萤光素酶实验验证了 SPP1是hsa-miR-371a-5p的下游靶基因。五、结论oxLDL刺激HCAECs,使COLCA1表达上升,COLCA1吸附hsa-miR-371a-5p,使 hsa-miR-371a-5p 无法作用于 SPP1,SPP1 表达上升,诱导HCAECs发生氧化应激导致细胞凋亡,并且降低了 HCAECs的伤口愈合能力,最终导致冠状动脉粥样硬化进程的启动。
其他文献
1 研究背景与目的病毒性肝炎是一类由病毒引起的以肝脏病变为主要病理表现的感染性疾病。一些小型哺乳动物如鼠和鼩鼱等,可向人类传播多种人畜共患病原体,例如可以导致人类肝炎的鼠戊型肝炎病毒和汉坦病毒。导致肝炎的病毒一般具有肝脏嗜性,但由于肝脏血流丰富,一些不具有肝脏嗜性的病毒可随着血液循环进入肝脏从而被检出。了解鼠和鼩鼱等动物肝脏和血清中病毒的携带情况和基因特征,分析病毒的组织嗜性和跨物种传播的可能性,
肾脏是维持内环境稳态和新陈代谢有序进行的重要器官之一,具有排出代谢废物、维持电解质和酸碱平衡的能力。急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）指突发的肾功能下降,如果未及时干预易发展为慢性肾损伤或肾衰竭。AKI的常规诊断方法包括尿素氮、血肌酐和病理检测。然而,这些检测方法有创,且相对病程有滞后性。磁共振成像（magnetic resonance imaging,MRI）作为一种无
研究背景膀胱输尿管反流（Vesicoureteral Reflux,VUR）是神经源性膀胱（Neurogenic Bladder,NGB）患者疾病进展中不可避免的病理生理过程。持续性的VUR可能引起肾积水、肾衰竭甚至死亡,严重影响着患者的生活质量。目前,临床上对诊断和预警VUR的发生相关的无创性生物学指标尚未明确。研究目的1.旨在识别VUR和Non-VUR组尿液外泌体的不同蛋白谱,并探索是否存在潜
背景:有血流动力学显著影响的动脉导管未闭（hsPDA）是极低出生体重儿（VLBW）管理的难点。hsPDA增加VLBW的死亡风险,导致严重的心肺功能障碍,并与远期不良结局有关。hsPDA常常需要治疗,内科处理的重点是提高关闭率,术后处理的重点是减少结扎术后心脏综合征（PLCS）,因为PLCS增加死亡及不良远期结局的风险。本研究第一部分分析hsPDA内科治疗失败的影响因素,探讨hsPDA内科治疗失败的
研究目的和背景脑出血急性期死亡率高达30%,恢复期的再次出血及后续继发性损伤严重影响其预后。由于缺乏可靠的重复脑出血模型,目前针对重复脑出血的研究仅限于对重复脑出血患者临床资料分析,缺少对重复脑出血病理过程的机制研究。本研究拟应用双阶段双侧纹状体胶原酶注射方法建立重复脑出血小鼠模型,探讨其行为学特征及其潜在的病理机制,为寻找改善脑出血长期预后的治疗策略奠定基础。方法用立体定向技术制作重复脑出血模型
研究背景与目的:桥本甲状腺炎（Hashimoto thyroiditis,HT）作为潜在的危险因素对甲状腺乳头状癌（PTC）的影响存在两面性,一方面促进PTC的发生,但又改善其预后。既往文献报道HTPTC中浸润的淋巴细胞增多,与预后改善相关。这提示着HTPTC肿瘤微环境的改变可能是HT改善PTC的关键因素。但目前有关HTPTC肿瘤微环境的整体阐述及细胞间相互作用特征病不清晰。因此本研究拟通过单细胞
研究背景及目的:肾透明细胞癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一。我国肾透明细胞癌发病率和致死率呈逐年上升趋势。在临床上对于局限性肾透明细胞癌,手术切除是最有效的治疗方式;然而对于转移性肾透明细胞癌,以舒尼替尼为代表的靶向药物仍然是一线治疗用药。然而,靶向治疗效果亦不甚满意,5年存活率不足10%。血管拟态已被证实是除肿瘤血管以外,为肿瘤提供营养的替代途径之一,影响肿瘤的侵袭转移以及对药物敏感性等。然而,
历史作为初中阶段的人文学科,对于培养学生的历史思维有非常重要的作用。在传统教学理念的影响下,历史老师容易忽视学生学习的主观能动性,采用填鸭式教学方法进行教学,无法满足深度教学的要求。老师在初中历史的教学活动中,应该通过教学设计激发学生的学习兴趣,引领学生进行深度学习,充分发挥出学生在学习中的主体作用,有效提高初中历史的教学质量。
目的 目前对肾集合管癌（CDC）症状体征、病理、治疗方案和预后特征仍有较大争议。CDC中国患者基因组学图谱缺乏。本研究旨在总结探讨CDC临床诊疗特征;初步构建CDC中国患者单核苷酸变异（SNV）、拷贝数变异（CNV）和胚系突变的基因组学图谱。方法 回顾分析广东省第二人民医院和上海市长海医院确诊CDC,且满足纳入和排除标准的19例患者的临床病理特征、术式、并发症、辅助治疗和预后。进一步,对满足纳入和
研究背景探索非酒精性脂肪肝病（NAFLD）新的血清学标志物及筛查工具至关重要。生物信息学技术深化了对人类肝病的分子机制和病理生理学变化的理解。2020年NAFLD以新的诊断标准更新了命名-代谢相关脂肪性肝病（MAFLD）。蔗糖非发酵1相关激酶（SNRK）是人体能量代谢及炎症研究新兴领域,目前国内外尚无SNRK与NAFLD独立预测因子SHBG的关联分子机制以及SNRK在肝脏能量代谢和炎症调控相关中的