酸模属DNA条形码的筛选与鉴定研究

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酸模属(Rumex L.)为蓼科第二大属,世界约有200余种,我国有26种,2个变种,全国各省均有分布。目前酸模属植物存在优良基因流失现象,部分种群数量少野生资源极剧减少,临床应用缺乏品种标准和鉴定,且有药理研究不足和不相符等问题,需要对该属进行准确的鉴定,DNA条形码技术是当下较好的解决途径之一。DNA条形码技术是利用DNA分子进化原理,使用标准的、短的、通用的DNA片段对物种进行准确、快速及自动的鉴别,是近几年中药材分子鉴定研究的热点。本文对酸模属植物药理作用、化学成分、传统功效等方面国内外相关文献报道进行了较全面的综述,为全面合理探讨该属内亲缘学关系奠定前期基础。实验研究方面选取了ITS、ITS2、psbA-trnH、matK、rbcL共计五组候选序列。选取酸模属54个植物样本,对其进行PCR扩增测序后计算扩增成功率和测序成功率。扩增成功率为psbA-trnH,matK,rbcL>ITS>ITS2;测序成功率为 psbA-trnH>matK>rbcL>ITS2>ITS。PsbA-trnH序列的PCR扩增效率和测序成功率均为最高并且高于90%。将该序列作为鉴定酸模属药用植物的最佳片段。反应产物经过双向测序,使用CodonCode Aligner软件进行序列拼接及峰图校对,切除引物和低质量区域。接着使用MEGA 6.0软件对所得序列进行比对分析,基于K-2-P模型计算种内种间遗传距离。使用邻接法(NJ)构建系统发育树,比较不同序列的种内、种间变异关系。结果表明酸模属psbA-trnH序列种内平均K2P距离均小于种间平均K2P距离;应用相似性搜索法分析结果表明psbA-trnH序列可准确鉴定酸模属植物;NJ树显示除巴天酸模和皱叶酸模聚为一支,其余酸模属植物表现出良好的单系性。因此,psbA-trnH序列可用于鉴定东北地区酸模属植物,为酸模属植物的临床安全用药提供依据。
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