结核杆菌对感染宿主巨噬细胞凋亡的调控作用及其机制研究

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目的:构建结核分枝杆菌感染RAW264.7巨噬细胞的模型,探讨不同毒力的结核分枝杆菌感染对巨噬细胞凋亡的调控作用及其机制。方法:1.用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株和卡介苗BCG分别感染巨噬细胞RAW264.7株,同时设空白对照组,在感染后1h、6h、12h及24h,用流式细胞技术检测各组巨噬细胞的凋亡率,分析其时相性变化。2.应用Western blot和RT-PCR技术检测上述各组各时间点Caspase-3及Bcl-2蛋的表达水平(蛋白水平和基因水平)。结果:1.结核分枝杆菌感染组的凋亡率显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);BCG感染组早期凋亡率高于H37Rv株感染组,在感染后1h、12h和24h凋亡率升高显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.结核分枝杆菌感染巨噬细胞后,其Caspase-3蛋白表达增高,结核分枝杆菌感染组的Caspase-3蛋白表达高于对照组,对照组<H37Rv株感染组<BCG感染组,差异具有统计学意义(P<0.05);BCG感染组Caspase-3蛋白表达高于H37Rv株感染组,在感染后1h、12h和24h蛋白表达显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.结核分枝杆菌感染组Caspase-3基因相对表达量高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);BCG感染组Caspase-3基因表达高于H37Rv株感染组,在感染后1h和24h表达显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.结核分枝杆菌感染组的Bcl-2蛋白表达低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);H37Rv感染组在1h、6h和24h的Bcl-2蛋白表达高于BCG感染组,差异具有统计学意义(P<0.05)。5.结核分枝杆菌感染组Bcl-2基因相对表达量低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);H37Rv株感染组Bcl-2基因表达高于BCG感染组,在感染后1h、12h和24h的相对表达显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.巨噬细胞感染结核分枝杆菌后凋亡率增高,其凋亡与结核分枝杆菌的毒力强弱有关,胞的凋亡水平存在差异,毒力弱的结核分枝杆菌感染的巨噬细胞早期凋亡显著。2.不同毒力的结核分枝杆菌感染巨噬细胞的Caspase-3表达水平存在差异,弱毒力结核分枝杆菌感染的巨噬细胞早期的Caspase-3表达水平更显著。3.不同毒力的结核分枝杆菌感染巨噬细胞的Bcl-2表达水平存在差异,毒力的结核分枝杆菌感染的巨噬细胞早期的Bcl-2表达水平更显著。4.结核分枝杆菌毒力的强弱、巨噬细胞Caspase-3和Bcl-2的表达与细胞早期凋亡有关。
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