目的:鲍曼不动杆菌是一种非发酵革兰阴性杆菌,广泛分布于医院环境,已成为医院感染的重要条件致病菌。鲍曼不动杆菌可通过外膜囊泡（outer membrane vesicles,OMVs）与宿主细胞相互作用,诱导炎症因子的产生,起到杀菌抑菌作用。外膜蛋白Omp33-36是一种可通过OMVs释放的主要毒性蛋白之一,本研究旨在探讨鲍曼不动杆菌外膜蛋白Omp33-36对小鼠巨噬细胞系Raw264.7的调节和在鲍曼不动杆菌感染过程中的作用。方法:（1）常规培养鲍曼不动杆菌ATCC 17978^T与ATCC 19606^T,差速离心法分离细菌外膜囊泡,通过SDS-PAGE凝胶电泳和考马斯亮蓝染色等方法进行细菌外膜囊泡的鉴定。（2）将分离的外膜囊泡进行系列稀释,取不同浓度的外膜囊泡与小鼠巨噬细胞系Raw264.7共培养,采用CCK-8法测定细胞生存率,以两种标准菌株的外膜囊泡对细胞生存率影响接近的浓度确定为拟用刺激浓度。（3）以三种不同刺激浓度的外膜囊泡与小鼠巨噬细胞系Raw 264.7共培养24 h,测定促炎因子IL-6、TNF-α和抑炎因子IL-10、TGF-β的mRNA表达水平。（4）利用Rec_Ab系统敲除鲍曼不动杆菌ATCC17978^T外膜蛋白Omp33-36基因,构建鲍曼不动杆菌Omp33-36缺失株ΔOmp33::17978。（5）提取鲍曼不动杆菌Omp33-36缺失株ΔOmp33::17978和野生株的外膜囊泡,通过CCK-8法测定细胞生存率和确定外膜囊泡刺激浓度。与Raw 264.7共培养24 h后,测定促炎因子IL-6、TNF-α和抑炎因子IL-10、TGF-β的mRNA表达水平。（6）鲍曼不动杆菌Omp33-36缺失株ΔOmp33::17978和野生株的外膜囊泡与Raw 264.7共培养至24 h,流式细胞术检测M1和M2巨噬细胞相关标志物CD86和CD206。（7）重组表达去除19aa信号肽的鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段（20-299aa）,纯化该片段。以两种不同浓度Omp33-36蛋白质刺激Raw 264.7,测定促炎因子IL-6、TNF-α和抑炎因子IL-10、TGF-β的mRNA表达水平。结果:（1）鲍曼不动杆菌标准菌株ATCC17978^T和ATCC19606^T产生外膜囊泡的能力没有显著差异,其OMVs的蛋白质SDS-PAGE电泳结果亦相似。但本研究构建的Omp33-36缺失株ΔOmp33::17978相较于野生株,其产生外膜囊泡的能力呈下降趋势。（2）鲍曼不动杆菌标准菌株外膜囊泡具有轻微细胞毒性:鲍曼不动杆菌外膜囊泡在低浓度条件下（<10μg/mL）对巨噬细胞RAW264.7的生存状况影响较小,即使高浓度的鲍曼不动杆菌外膜囊泡（50μg/mL）对巨噬细胞RAW264.7的细胞毒性作用依旧较弱。（3）两种不同鲍曼不动杆菌标准菌株来源的外膜囊泡与巨噬细胞Raw264.7共培养,促炎因子IL-6、TNF-α的mRNA表达水平较空白对照组均显著增高,但抑炎因子IL-10、TGF-βmRNA表达水平两组间有差异。（4）利用Rec_Ab系统构建的鲍曼不动杆菌Omp33-36缺失株ΔOmp33::17978的外膜囊泡与Raw 264.7共培养24h后,促炎因子IL-6、TNF-α的mRNA表达水平显著低于野生株OMVs处理组,抑炎因子IL-10和TGF-β的mRNA表达水平显著高于野生株OMVs处理组。在共培养至24h时,Raw 264.7向M1型极化的比例减少。（5）重组表达的鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段（20-299aa）与Raw264.7共培养24 h后,炎症因子IL-6、TNF-α与抑炎因子IL-10和TGF-β的mRNA表达水平均增高,且具有浓度依赖性,但相较于抑炎因子,促炎因子的mRNA表达水平有更显著升高的趋势。结论:（1）两株鲍曼不动杆菌标准菌株的外膜囊泡,均可刺激小鼠巨噬细胞系Raw264.7高水平表达促炎因子IL-6和TNF-αmRNA,但对抑炎因子IL-10、TGF-β的mRNA表达水平的调节具有差异性。（2）鲍曼不动杆菌OMV中的主要外膜蛋白Omp33-36对小鼠巨噬细胞系Raw 264.7兼具促炎及抑炎作用。（3）鲍曼不动杆菌外膜囊泡的主要外膜蛋白Omp33-36能够促进小鼠巨噬细胞系Raw 264.7向M1型极化。