【摘 要】
：
目的探究积雪草酸（Asiatic acid,AA）对乳腺癌4T1细胞的增殖、迁移及凋亡作用的影响,并探讨活性氧（Reactive oxygen species,ROS）在AA诱导4T1细胞凋亡中的作用。方法1、MTT法检测不同浓度的AA对乳腺癌4T1细胞增殖的影响,筛选出有效药物浓度用于后续实验研究;40μmol·L-1的AA处理后,通过集落形成实验观察4T1细胞克隆形成能力变化。2、为探究AA是
论文部分内容阅读
目的探究积雪草酸（Asiatic acid,AA）对乳腺癌4T1细胞的增殖、迁移及凋亡作用的影响,并探讨活性氧（Reactive oxygen species,ROS）在AA诱导4T1细胞凋亡中的作用。方法1、MTT法检测不同浓度的AA对乳腺癌4T1细胞增殖的影响,筛选出有效药物浓度用于后续实验研究;40μmol·L-1的AA处理后,通过集落形成实验观察4T1细胞克隆形成能力变化。2、为探究AA是否通过ROS诱导4T1细胞凋亡:将实验组分为空白对照组、AA组和AA+NAC联合处理组,通过JC-1染色检测4T1细胞的线粒体膜电位相关变化;Hoechst 33342染色观察4T1细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术检测4T1细胞凋亡率的变化;Western Blot法检测Bax、cleaved-caspase3、Bcl-2、Cytochrome c蛋白表达水平;3、DCFH-DA探针标记,通过流式细胞术对4T1细胞内ROS的水平进行分析。4、划痕实验分析AA对4T1细胞迁移愈合能力的影响以及Western Blot法检测迁移相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达水平。结果1、AA可以显著抑制4T1细胞的增殖,且具有浓度依赖性,其24 h的IC50值为41.01μmol·L-1;经过AA处理7天后,4T1细胞的集落形成率下降（P＜0.01）。2、与空白对照组相比,AA组线粒体膜电位的红/绿荧光比明显下降（P＜0.01）,与AA组比较,NAC干预组的红/绿荧光比明显上升（P＜0.01）;Hoechst 33342染色显示与空白对照组相比,AA组凋亡细胞的细胞核显示出致密浓染的亮蓝色荧光,且凋亡细胞增多（P＜0.01）,加入NAC干预后,亮蓝色凋亡细胞减少（P＜0.01）;流式细胞术Annexin V/PI染色结果显示,与空白对照组相比,AA组凋亡率升高（P＜0.01）,加入NAC干预后,凋亡率降低（P＜0.01）;Western Blot结果显示与空白对照组比,AA组蛋白Bax、cleaved-caspase3、Cytochrome c表达升高,Bcl-2表达下降（P＜0.01）,NAC作用后可以逆转上述蛋白表达水平变化。3、与空白对照组比,AA可以升高4T1细胞内ROS水平（P＜0.01）,加入NAC作用后,细胞内ROS水平降低（P＜0.01）。4、AA处理后乳腺癌4T1细胞迁移率下降（P＜0.01）;同时迁移相关蛋白E-cadherin表达升高,而N-cadherin、Vimentin表达下降（P＜0.05）。结论AA可以抑制乳腺癌4T1细胞的增殖、迁移且诱导其凋亡。其对4T1细胞迁移抑制可能与调节EMT相关蛋白表达有关,促进凋亡作用可能与诱导了胞内ROS升高,进而上调蛋白cleaved-caspase3、Bax以及Cytochrome c的表达,下调蛋白Bcl-2的表达相关。
其他文献
目的 了解广东省居民中医药健康文化素养水平情况，为有关部门制定针对中医药健康文化素养提升策略提供科学依据。方法 采用分层多阶段PPS法与随机抽样相结合，以全省3802名15～69岁常住人口为研究对象，统计方法主要采用χ~2检验和Logistic回归分析。结果 2018年广东省居民中医药健康文化素养总体水平为14.49%,5维度素养水平从高至低为：信息理解能力素养水平54.26%、文化常识素养水平3
目的研究PMS2表达对结肠癌细胞SW480生物学行为的影响,进一步探究PMS2、ERCC1及ERK信号转导途径的关系,为结肠癌的发生发展提供新的理论依据。方法1、采用Higene转染方法,将PMS2过表达质粒、si PMS2转入结肠癌SW480细胞中,下调和过表达目的基因PMS2,运用q PCR以及Western Blot方法验证转染效率。实验分组:（1）下调组:实验组（PMS2 inhibito
目的（1）探讨基于冠状动脉CT血管造影（coronary computed tomography angiography,CCTA）冠状动脉周围脂肪组织（pericoronary adipose tissue,PCAT）影像组学评分模型能否改善3年内主要不良心血管事件的预测（major adverse cardiovascular event,MACE）。（2）开发并验证一个结合临床风险因素和PC
目 的放射性肠道损伤是盆腹腔肿瘤放疗的主要毒副反应,也是放疗常见的急性并发症之一,目前临床上尚无特效的防治药物。本课题通过研究鸦胆子苦醇对小鼠肠道辐射损伤的防护作用,旨在为急性放射性肠道损伤提供新的防治手段。方 法将小鼠分为 Control组、IR 组及 0.5 mg/kg、1.0 mg/kg、1.5 mg/kg BRU 给药组,每组6只,在照射前1 d和3h分别给予腹腔注射鸦胆子苦醇或安慰剂,并
目的作为“基因组的守护者”,人体内重要的肿瘤抑制因子p53对正常细胞生长和肿瘤预防都至关重要。正常情况下,它参与体内DNA修复、细胞周期阻滞、凋亡、自噬、翻译和代谢等多种细胞途径,从而发挥抗肿瘤作用。但是,大量基因组测序结果表明,约半数以上的恶性肿瘤均存在p53突变,大部分是DNA结合域（DNA-binding domain,DBD）的错义突变。突变型p53不仅丧失了野生型p53（wild-typ
研究背景ARHGAP17（Rho GTPase Activating Protein 17）是Rho GAPs的成员之一,主要参与调控细胞骨架重组、细胞极性维持、细胞增殖迁移等过程,在许多细胞行为过程中充当关键分子开关。近来,ARHGAP17作为恶性肿瘤抑癌基因也相继被报道,如结肠癌、宫颈癌、乳腺癌等。研究目的本研究旨在探讨ARHGAP17在肝癌中的表达及其在肿瘤进展中的潜在调控作用。研究内容与方
目的探究脊髓损伤后锌离子治疗对脊髓和神经元糖代谢进行调控的分子机制以及对小鼠运动功能的恢复作用。方法我们首先利用H2O2构建了细胞氧化应激模型,利用Allen’s打击法建立了小鼠SCI模型,以评估锌离子在体外和体内的治疗作用。葡萄糖的转运和葡萄糖的利用（保护线粒体）对葡萄糖代谢至关重要,所以本实验从葡萄糖摄取和线粒体保护两个方面入手。检测葡萄糖摄取:在体外,通过WB和免疫荧光检测了葡萄糖转运蛋白的
目的探讨长链非编码RNA RMRP（lnc RNA-RMRP）在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞中的表达。研究RMRP基因对NSCLC细胞增殖侵袭能力的影响并探讨其作用机制,旨在明确RMRP基因在非小细胞肺癌发生发展中的作用。探讨RMRP基因是否通过靶向调控mi R-1-3p表达影响NSCLC细胞增殖和凋亡,为NSCLC的靶向治疗提供新的思路。方
目的评估丹参酮ⅡA干预对缺氧条件下心肌前体细胞存活和归巢能力的影响并探讨其相关机制,期望为丹参酮ⅡA在心肌再生中的应用提供有价值的理论和实验依据。方法1、用不同浓度的氯化钴（50、100、150、200、250、300μmol/L）处理大鼠胚胎心肌H9c2细胞48h,用MTS法评估氯化钴对H9c2细胞增殖的影响,流式细胞法分析氯化钴对H9c2细胞凋亡的影响,根据检测结果选择合适浓度的氯化钴进行后续