研究背景和目的肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,大多数肺癌患者就诊时已属中晚期,化疗成为其主要的治疗手段。肿瘤细胞出现多药耐药(multidrug resistance,MDR)是化疗失败的重要原因。MDR的分子机制极其复杂,目前研究较多的与肿瘤耐药机制相关的因素包括:膜转运蛋白介导的药物外排泵机制、酶介导的肿瘤细胞解毒功能增强、改变细胞内药物靶酶水平或细胞内酶与药物的亲和力及细胞抗凋亡作用增强等。其中,ATP结合盒(ATP binding cassette,ABC)转运蛋白介导的细胞毒性药物的外排被认为是最主要的机制。ATP结合盒转运蛋白亚家族C4(ATP-binding cassette,sub-family C,member 4,ABCC4)是ABC转运蛋白家族C亚家族成员之一,为ATP能量依赖性跨膜蛋白,与化疗药物特异性结合并将其泵到细胞外,介导肿瘤的MDR。目前研究表明ABCC4与胃癌、前列腺癌、胰腺癌、卵巢癌等肿瘤的耐药密切相关。基于我们前期研究及文献报道的基础上:ABCC4在肺癌细胞系中高表达,耐药肺癌细胞株ABCC4表达水平高于亲本细胞。本研究进一步探讨ABCC4对人肺癌细胞耐药性的影响及其可能的分子机制,以期为临床上肺癌化疗耐药的研究提供新的靶点。方法我们前期通过ABCC4短发夹状RNA(short hairpin RNA,sh RNA)重组慢病毒载体感染A549和801D细胞系,构建了ABCC4表达下调的A549和801D细胞模型。蛋白免疫印迹(Western blot)对已构建细胞模型的ABCC4沉默效果进行验证;给予不同浓度的表阿霉素作用24小时,观察细胞增殖的抑制情况及半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)。并观察在ABCC抑制剂MK-571作用下,不同浓度表阿霉素对A549细胞增殖的抑制情况及IC50的变化。结果(1)ABCC4 sh RNA重组慢病毒载体感染A549和801D细胞系,建立ABCC4表达下调细胞命名为ABCC4-KD(ABCC4-knockdown)细胞,无意义序列重组慢病毒载体干扰A549和801D细胞,建立空载对照(negative control,NC)细胞。ABCC4蛋白表达在A549-ABCC4-KD细胞和801D-ABCC4-KD细胞下调,说明表达下调细胞成功构建。(2)与A549-NC细胞相比,表阿霉素浓度50μg/ml、60μg/ml和70μg/ml时对A549-ABCC4-KD细胞增殖的抑制率明显增加,A549-ABCC4-KD细胞对表阿霉素的IC50明显下降。表阿霉素浓度0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml和4μg/ml时,对801D-ABCC4-KD和801D-NC细胞增殖的抑制率差异均无统计学意义,两种细胞对表阿霉素的IC50差异无统计学意义。(3)在MK-571作用下,表阿霉素浓度30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml和70μg/ml时,对A549细胞增殖抑的制率均明显高于无MK-571的对照组,A549细胞对表阿霉素的IC50明显下降。结论(1)在肺癌中,ABCC4是化疗耐药的靶点;ABCC抑制剂MK-571通过抑制ABCC4,提高化疗疗效,更进一步证明了ABCC4的作为化疗耐药靶点的意义。(2)801D细胞在下调ABCC4表达后,对化疗反应不同于A549细胞,可能肺癌耐药机制相对比较复杂,存在着不依赖于ABCC4的耐药机制。研究背景和目的ABCC4是ABC转运蛋白家族C亚家族成员之一,通过与化疗药物特异性结合并将其泵到细胞外,介导肿瘤的MDR。我们的研究结果显示ABCC4与肺癌A549细胞对表阿霉素的耐药相关,前期对肺癌组织中ABCC4的表达进行检测,30例肺癌患者癌组织ABCC4 m RNA水平高于配对癌旁组织。对于肺癌患者血清中ABCC4水平及其临床意义的研究目前尚未见相关报道。本研究首先检测肺癌患者血清中ABCC4水平,分析其与临床病理参数的关系;并动态监测化疗过程中血清ABCC4水平的变化,分析血清ABCC4水平动态变化与化疗疗效关系,进一步研究ABCC4与化疗耐药的相关性。方法收集2013年8月-2014年6月就诊于首都医科大学附属北京胸科医院初治肺癌患者117例,其中接受手术患者35例,接受化疗患者82例,化疗方案采用铂类为基础的标准一线方案。所有患者治疗前(手术前、化疗前)采集清晨空腹外周静脉血,同期采集53例健康志愿者血清标本作为对照组,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中ABCC4水平。接受化疗患者于第一周期化疗、第二周期化疗、第四周期化疗开始后3周进行疗效评价,疗效评价分为完全缓解/部分缓解/疾病稳定(complete response/partial response/stable disease,CR/PR/SD)和疾病进展(progressive disease,PD),与疗效评价同步检测血清ABCC4水平。分析肺癌患者血清ABCC4水平与临床病理参数的关系,分析化疗过程中血清ABCC4水平动态变化与化疗疗效关系。结果(1)肺癌患者血清ABCC4水平显著高于健康对照者(P<0.001);肺癌患者血清ABCC4阳性率显著高于健康对照组(P<0.001)。(2)肺癌患者血清ABCC4水平及血清ABCC4阳性率均与远处转移及TNM分期相关(P<0.05);早期患者,血清ABCC4水平及阳性率明显增高。(3)NSCLC患者血清ABCC4水平及血清ABCC4阳性率均与区域淋巴结转移、远处转移及TNM分期相关(P<0.05);早期患者,血清ABCC4水平及阳性率明显增高。(4)NSCLC患者和SCLC患者血清ABCC4水平在化疗过程中维持稳定,血清ABCC4水平的动态变化与化疗疗效无相关性。结论(1)血清ABCC4水平在肺癌的早期诊断有潜在的临床应用前景。(2)肺癌患者血清ABCC4水平与性别及组织学类型相关;早期肺癌患者血清ABCC4水平明显高于晚期患者。(3)未发现血清ABCC4水平动态变化与化疗疗效有相关性。研究背景与目的化疗是晚期肺癌的主要治疗手段,及时有效的评估化疗疗效至关重要。实体瘤疗效评价标准(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors,RECIST)是目前疗效评价的金标准,影像学检查为其主要评价手段。但影像学的改变出现较晚不利于尽早做出疗效判断,血清学标志物的变化早于影像学改变,易于采集、简单、无创、经济、重复性好,可以实时监测治疗过程中肿瘤生物学特性的变化,更有助于疗效的判断。肿瘤的侵袭和转移是恶性肿瘤造成患者死亡的主要原因,基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是肺癌侵袭转移研究的热点之一。基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)是MMPs家族的重要成员,因参与基底膜与细胞外基质(extracellular matrix,ECM)主要成分IV型胶原的降解,与肿瘤的侵袭和转移密切相关。已有学者研究血清MMP-9变化与化疗疗效关系,结果显示与化疗前相比,化疗有效组血清MMP-9下降,而无效组血清MMP-9水平无变化。这些研究结果表明,血清MMP-9水平变化对于NSCLC化疗疗效评价有着重要的临床参考价值,有待于进一步的研究。本研究拟通过连续动态监测化疗过程中血清MMP-9动态变化,分析血清MMP-9动态变化与化疗疗效关系,探讨血清MMP-9水平动态变化在化疗疗效评价中的意义。方法收集2013年8月-2014年6月就诊于首都医科大学附属北京胸科医院初治肺癌患者82例,采用铂类为基础的标准一线方案化疗。患者于化疗前、第一周期化疗、第二周期化疗、第四周期化疗开始后3周采集清晨空腹外周静脉血,ELISA法检测血清中MMP-9水平。并于第一周期化疗、第二周期化疗、第四周期化疗开始后3周进行疗效评价,分为完全缓解/部分缓解/疾病稳定(complete response/partial response/stable disease,CR/PR/SD)和疾病进展(progressive disease,PD)。分析化疗过程中MMP-9动态变化与化疗疗效的关系。结果与化疗前相比,NSCLC患者化疗后血清MMP-9水平下降。根据疗效评价,分析一周期化疗后、两周期化疗后、四周期化疗后不同疗效患者血清MMP-9水平变化的差异。分析PD患者PD时与PD前血清MMP-9水平变化和CR/PR/SD患者CR/PR/SD时与前次标本采集点血清MMP-9水平变化的差异。与PD前相比,PD时患者血清MMP-9水平升高;与前次标本采集点相比,CR/PR/SD时患者血清MMP-9水平降低或维持稳定。一周期化疗后、两周期化疗后、四周期化疗后,PD患者血清MMP-9水平变化和CR/PR/SD患者血清MMP-9水平变化的差异均有统计学意义(一周期化疗后:P<0.001;两周期化疗后:P<0.001;四周期化疗后:P=0.01)。进一步分析血清MMP-9水平动态变化与化疗疗效的相关性。一周期化疗后疗效PD患者中血清MMP-9水平升高率是100%,两周期化疗后疗效PD患者中血清MMP-9水平升高率是76.9%,四周期化疗后疗效PD患者中血清MMP-9水平升高率是84%,其中一周期化疗后及两周期化疗后疗效与血清MMP-9水平变化有相关性(一周期化疗后:P=0.002;两周期化疗后:P=0.002)。结论(1)肺癌患者血清MMP-9水平与性别、年龄、吸烟状态、PS评分、组织学类型、原发肿瘤大小、区域淋巴结转移、远处转移及TNM分期无相关性。(2)NSCLC患者化疗过程中血清MMP-9水平变化与化疗疗效密切相关,有作为化疗疗效监测标志物的潜在价值。研究背景与目的以吉非替尼、厄洛替尼及埃克替尼为代表的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)治疗为EGFR突变的晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者带来了很大的生存获益,但大多数患者在治疗后不同阶段会出现耐药,而对于耐药后治疗策略目前尚无标准方案。本研究旨在探讨EGFR-TKI治疗进展后不同治疗策略对患者疗效及生存期的影响。方法回顾性分析接受EGFR-TKI治疗后出现进展且接受后续治疗的晚期肺腺癌患者240例,根据EGFR-TKI进展后首次治疗策略分为继续EGFR-TKI治疗组21例、EGFR-TKI联合化疗组23例、单纯化疗143例及最佳支持治疗组(best supportive care,BSC)53例,分析接受不同治疗策略患者的疗效及生存期。结果240例患者均可评价总生存期(overall survival,OS),除外BSC的53例患者,187例患者可评价进展后治疗的疗效及无进展生存期(progression-free survival,PFS)。继续EGFR-TKI治疗组、EGFR-TKI联合化疗组及单纯化疗组疾病控制率(disease control rate,DCR)分别为66.7%、73.9%和44.8%,均衡混杂因素后结果显示EGFR-TKI联合化疗组DCR显著高于化疗组(OR=4.057,95%CI=1.485-11.083,P=0.006)。继续EGFR-TKI治疗组、EGFR-TKI联合化疗组、单纯化疗组EGFR-TKI治疗进展后的中位PFS分别为3.0个月、3.3个月和2.0个月,Cox多因素生存分析提示EGFR-TKI联合化疗组的PFS显著长于单纯化疗组(HR=0.611,95%CI=0.385-0.971,P=0.037)。继续EGFR-TKI治疗组、EGFR-TKI联合化疗组、单纯化疗组及BSC组的中位OS分别为6.9个月、11.6个月、8.8个月和0.9个月,Cox多因素生存分析提示与BSC组比较,继续EGFR-TKI治疗组(HR=0.332,95%CI=0.192-0.573,P<0.001)、EGFR-TKI联合化疗组(HR=0.265,95%CI=0.145-0.485,P<0.001)、单纯化疗组(HR=0.331,95%CI=0.220-0.498,P<0.001)OS均显著延长。结论部分晚期肺腺癌患者初次在EGFR-TKI治疗耐药后仍可从继续EGFR-TKI联合化疗方案受益;对于EGFR-TKI治疗耐药后患者,如体能状况评分良好且能够继续接受治疗,应予以积极综合治疗。