【摘 要】
：
目的:低强度脉冲超声波（low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS）是一种在骨再生领域广泛应用的物理学疗法。本组前期实验对LIPUS作用下多孔钛合金支架材料上成骨细胞的生物学行为展开了体内外研究,发现在兔颌骨缺损模型中,LIPUS可以促进新骨形成及血管生成,然而这种作用的机制还没有完全阐明。血管生成-成骨耦合指骨折愈合过程中骨再生和血管生成之间密切的空间和时间联系,
【基金项目】
：
国家自然科学基金（81870811）；
论文部分内容阅读
目的:低强度脉冲超声波（low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS）是一种在骨再生领域广泛应用的物理学疗法。本组前期实验对LIPUS作用下多孔钛合金支架材料上成骨细胞的生物学行为展开了体内外研究,发现在兔颌骨缺损模型中,LIPUS可以促进新骨形成及血管生成,然而这种作用的机制还没有完全阐明。血管生成-成骨耦合指骨折愈合过程中骨再生和血管生成之间密切的空间和时间联系,在维持骨代谢平衡中起关键作用,其机制主要和成骨细胞、内皮细胞及其前体之间的直接细胞间通讯以及其产生的各种自分泌和旁分泌因子相关。外泌体是细胞分泌的直径在30-150nm之间的细胞外双层脂质囊泡,内含非编码RNA、蛋白质、DNA等多种内含物,可以通过传递靶向miRNA在血管生成-成骨耦合过程中发挥作用。因此,本研究将LIPUS作用下小鼠胚胎成骨前体细胞（mouse embryo osteoblast precursor cells,MC3T3-E1）分泌的外泌体和人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）共培养,通过检验内皮细胞的生物学效应,研究LIPUS能否通过影响MC3T3-E1细胞的外泌体在成骨细胞和内皮细胞的细胞间通讯中发挥作用。为进一步探究其机制,应用lllumina-Seq技术对Lipus组及Control组的外泌体进行small RNA测序,对测序结果进行生物信息学分析,为下一步的体内外机制研究奠定基础。研究方法:1、将MC3T3-E1细胞接种到多孔钛合金支架材料上,加载LIPUS和假辐照,4、7天后收集细胞上清,超高速离心法分离外泌体。透射电镜鉴定外泌体形态,纳米粒子追踪技术鉴定外泌体粒径分布及浓度,免疫印迹法鉴定外泌体标志蛋白。2、将Dil细胞膜红色荧光染料预染的外泌体和HUVEC细胞共培养,共聚焦显微镜下观察外泌体摄取情况。用CCK8法,Transwell小室法,成管实验分别检测Lipus组和Control组外泌体对HUVEC细胞增殖、迁移、管形成能力的影响。3、应用lllumina-Seq技术对Lipus组及Control组的外泌体进行small RNA测序,筛选差异性表达miRNA,进行靶基因预测和富集性分析。结果:1、透射电镜下观察到30-150nm茶托样双层囊泡,NTA检验样本粒径分布在30-200nm间,表面表达HSP70、TSG101等标志性分子,证明在Lipus组和Control组上清中都成功提取了外泌体。2、Lipus组和Control组外泌体均能被HUVEC细胞摄取。Lipus组外泌体在共培养24、48、72小时后均可以促进HUVEC细胞增殖（P＜0.05）,Control组外泌体在共培养24、72小时后促进HUVEC细胞增殖（P＜0.05）,但两种外泌体之间没有显著差异（P＞0.05）。两种外泌体均可促进HUVEC细胞迁移及成血管,Lipus组外泌体表现出更好的效应（P＜0.05）。3、测序结果筛选出LIPUS作用下的MC3T3-E1细胞外泌体中miR-124-5p、miR-128-3p、miR-28c表达上调（P＜0.01）,miR-5100、miR-3474表达下调（P＜0.01）,生物信息学分析得出差异性miRNA靶基因富集程度最高的是Wnt信号通路和丝裂原激活蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路。结论:LIPUS可以影响MC3T3-E1细胞外泌体中的miRNA表达,差异性表达的miR-124-5p、miR-128-3p、miR-28c、miR-5100和miR-3474可能通过调控MAPK、Wnt等信号通路对和外泌体共培养的HUVEC细胞生物学功能产生影响。
其他文献
目的:探索全牙列弹性（牙合）垫在基础治疗阶段,对于Ⅲ期/Ⅳ期牙周炎患者松动后牙的治疗效果。研究方法:经过伦理审批和受试者签署知情同意后,本研究选取2021年2月至2022年2月在中国医科大学附属口腔医院牙周科门诊就诊的牙周炎患者,最终收集对照组109颗患牙,上颌54颗,下颌55颗,来源于12位患者,其中男性3人,女性9人;弹性（牙合）垫组110颗患牙,上颌64颗,下颌46颗,来源于12位患者,其中
目的:磨牙症患者颞下颌关节紊乱病（TMD）的发生可能与后牙渐进性咬合紊乱相关。本研究通过观察单侧后牙垂直向高度渐进性降低的大鼠髁突改变,探究后牙渐进性咬合紊乱对髁突的影响,为磨牙症患者TMD的临床治疗提供启示。方法:8周龄雄性SD大鼠40只,随机分为4组（每组10只）。实验组均于实验第0天、第8天和第15天调磨左上后牙的临床牙冠0.3～0.4mm,一共调磨三次,牙冠总体高度降低约0.9～1.2mm
目的:建立无牙颌下颌骨、种植体及多基基台、全牙弓式及分段式上部结构的三维有限元模型,综合对比各修复设计的应力分布特点,从生物力学的角度评估和解释下颌正中弯曲及下颌无牙颌种植固定修复体不同设计方式对修复体各部件所受应力的影响,以期为临床设计无牙颌种植固定义齿提供参考。研究方法:选择中国医科大学附属口腔医院口腔种植科1例下颌骨健康、牙列完整的患者,采用锥形束CT扫描患者颌面部资料。使用Mimics、G
目的:牙周炎是由多种牙周致病菌入侵引发的,累及牙周支持组织的慢性炎症性疾病。其中,牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.g.）被视为牙周炎的最主要致病菌之一。P.g.的细胞壁脂多糖（lipopolysaccharides,P.g.LPS）作为导致牙周炎的重要的病原体成分。研究表明Drp1介导的线粒体动力学在炎症性疾病的发生发展中起重要作用,但其深层机制尚未明了。本研
目的:牙齿缺失破坏牙列结构和功能的完整性,是一种严重影响人类生活质量的常见口腔疾病。现有的义齿修复治疗方案尽管已经取得了令人满意的效果,但仍不能完全模拟天然牙的生理功能。生理性的牙齿再生旨在通过仿生调控时空特异性表达的信号分子进而实现牙齿组织的功能性再生,这使人类拥有“第三副牙列”成为可能。然而,再生形态和功能良好的牙齿必需阐明精确调控牙齿发育的基因表达模式,其中,微小RNA（micro RNA,
目的:在受损组织的修复与再生过程中,快速且充足的血管供应为组织提供氧气、营养物质以满足局部代谢需求。外泌体作为间充质干细胞旁分泌的重要物质,在促进血管生成和组织再生中发挥重要作用。血管内皮细胞（vascular endothelial cells,VECs）不断增殖,迁移并排列成管状结构是血管生成的初始过程。其中,细胞迁移是影响血管生成过程中管腔形成的重要因素,也是新生血管生成的基础。细胞分裂周期
目的：牙周炎是牙周致病菌作用于牙周支持组织,进而刺激宿主免疫系统,诱导免疫细胞浸润及免疫因子趋化,最终造成牙周支持组织发生进行性破坏的一类具有多种病因和致病因素特点的复杂疾病。在牙周致病菌诱导牙周炎发生之后,宿主产生的过度免疫应激反应进一步加重了牙周软组织发生破坏、牙槽骨丧失,从而导致牙周病的进展。因此研究牙周炎反应过程中机体免疫产生的损伤相关分子模式（Damage associated mole
目的:通过构建大鼠正畸牙移动模型,探讨牙根和对应牙槽骨的理化性质及两者的相对比值的个体差异是否影响正畸牙移动的速率及不良反应的发生风险,为临床治疗中预测和预防不良反应、缩短正畸治疗时长提供参考。方法:对35只Wistar雄性大鼠的左下颌第一磨牙给予14天正畸加力,解剖取材后的样品使用微计算机断层扫描测量牙齿移动距离及牙根炎性吸收和牙槽骨丧失的情况,分析牙根和牙槽骨的微观结构,利用显微硬度仪和扫描电
目的:三叉神经痛（Trigeminal neuralgia,TN）是一种常见的颅内神经病变,作为神经病理性疼痛（Neuropathic pain,NP）的一种类型,它严重影响着患者的身心健康。然而,三叉神经痛的病理机制十分复杂,目前临床上一些传统药物治疗以及手术治疗方案对疼痛的缓解均存在一定的局限性,所以,针对三叉神经痛的新的治疗方案已成为目前的研究热点。近年来,干细胞相关移植治疗被证实是一种有效
目的:牙齿全脱出是最严重的一种牙外伤类型,其治疗原则是尽量保存患牙,及时行牙齿再植术。再植牙的牙周组织愈合方式包括牙周膜愈合、牙根表面吸收、牙根炎症性吸收和牙根替代性吸收（replacement root resorption,RRR）。其中,以RRR最为严重,最终将导致牙齿脱落,严重影响患儿的咀嚼、发音、美观以及心理。如何减少再植牙RRR,促进牙周膜愈合是牙外伤领域亟待解决的重要临床问题。再植牙